Nature.com ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿದ್ದಕ್ಕಾಗಿ ಧನ್ಯವಾದಗಳು.ನೀವು ಬಳಸುತ್ತಿರುವ ಬ್ರೌಸರ್ ಆವೃತ್ತಿಯು ಸೀಮಿತ CSS ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಉತ್ತಮ ಅನುಭವಕ್ಕಾಗಿ, ನೀವು ನವೀಕರಿಸಿದ ಬ್ರೌಸರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (ಅಥವಾ ಇಂಟರ್ನೆಟ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲೋರರ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿ).ಈ ಮಧ್ಯೆ, ನಿರಂತರ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಶೈಲಿಗಳು ಮತ್ತು ಜಾವಾಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ರೆಂಡರ್ ಮಾಡುತ್ತೇವೆ.
ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿಯು ಒಂದು ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರೊಟೊಜೋವನ್ ಪರಾವಲಂಬಿಯಾಗಿದ್ದು ಅದು ಸೋಂಕಿತ ಹೋಸ್ಟ್‌ನ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪರಿಸರವನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಸಂಭವದೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ.ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸೋಂಕಿನಿಂದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ ಮೈಆರ್ಎನ್ಎ-21 ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಊಹಿಸುತ್ತೇವೆ.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ-ಸೋಂಕಿತ BV2 ಮೈಕ್ರೊಗ್ಲಿಯಾದಿಂದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳ ಆಂತರಿಕೀಕರಣವನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿ ಮತ್ತು ಟ್ಯೂಮರ್ ವಿಂಗಡಣೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಮೈಕ್ರೊಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ಮೈಕ್ರೊಆರ್‌ಎನ್‌ಎ-21ಎ-5ಪಿಯ ಅರೇಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ ಮೈಕ್ರೊಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಶನ್ ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ಗಳನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ miR-21 ಮಟ್ಟವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಮಾನವ U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳ ಪ್ರಸರಣದ ಮೇಲೆ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಾವು U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಗೆಡ್ಡೆ-ಸಂಬಂಧಿತ ಜೀನ್‌ಗಳ mRNA ಮಟ್ಟವನ್ನು ಸಹ ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿಯ ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾದ U87 ಗ್ಲಿಯೊಮಾ ಕೋಶಗಳ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, ಮೈಕ್ರೊಆರ್‌ಎನ್‌ಎ-21 ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆಂಟಿಟ್ಯೂಮರ್ ಜೀನ್‌ಗಳ (ಫಾಕ್ಸ್‌ಒ 1, ಪಿಟಿಎನ್ ಮತ್ತು ಪಿಡಿಸಿಡಿ 4) ಚಟುವಟಿಕೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾದ BV2-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ.ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಮೌಸ್ ಟ್ಯೂಮರ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ U87 ಜೀವಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ-ಸೋಂಕಿತ BV2 ಮೈಕ್ರೊಗ್ಲಿಯಾದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ miR-21 ಯು 87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಆಂಟಿಟ್ಯೂಮರ್ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಜೀವಕೋಶದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರವರ್ತಕವಾಗಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಸೂಚಿಸುತ್ತೇವೆ.
2018 ರಲ್ಲಿ ವಿಶ್ವಾದ್ಯಂತ 18.1 ಮಿಲಿಯನ್‌ಗಿಂತಲೂ ಹೆಚ್ಚು ಮುಂದುವರಿದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಪ್ರಕರಣಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಅಂದಾಜಿಸಲಾಗಿದೆ, ಪ್ರತಿ ವರ್ಷ ಸುಮಾರು 297,000 ಕೇಂದ್ರ ನರಮಂಡಲದ ಗೆಡ್ಡೆಗಳು ರೋಗನಿರ್ಣಯ ಮಾಡಲ್ಪಡುತ್ತವೆ (ಎಲ್ಲಾ ಗೆಡ್ಡೆಗಳಲ್ಲಿ 1.6%)1.ಮಾನವನ ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವ ಅಪಾಯಕಾರಿ ಅಂಶಗಳು ವಿವಿಧ ರಾಸಾಯನಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು, ಕುಟುಂಬದ ಇತಿಹಾಸ ಮತ್ತು ತಲೆ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮತ್ತು ರೋಗನಿರ್ಣಯ ಸಾಧನಗಳಿಂದ ಅಯಾನೀಕರಿಸುವ ವಿಕಿರಣವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿವೆ ಎಂದು ಹಿಂದಿನ ಸಂಶೋಧನೆಯು ತೋರಿಸಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಮಾರಕತೆಗಳಿಗೆ ನಿಖರವಾದ ಕಾರಣ ತಿಳಿದಿಲ್ಲ.ಪ್ರಪಂಚದಾದ್ಯಂತದ ಎಲ್ಲಾ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸರಿಸುಮಾರು 20% ವೈರಸ್‌ಗಳು, ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳು ಮತ್ತು ಪರಾವಲಂಬಿಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ ಸಾಂಕ್ರಾಮಿಕ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತವೆ3,4.ಸಾಂಕ್ರಾಮಿಕ ರೋಗಕಾರಕಗಳು ಡಿಎನ್‌ಎ ರಿಪೇರಿ ಮತ್ತು ಕೋಶ ಚಕ್ರದಂತಹ ಆತಿಥೇಯ ಕೋಶದ ಆನುವಂಶಿಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಉರಿಯೂತ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಹಾನಿಯಾಗಬಹುದು.
ಮಾನವನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಸಾಂಕ್ರಾಮಿಕ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳು ಹ್ಯೂಮನ್ ಪ್ಯಾಪಿಲೋಮವೈರಸ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ ಬಿ ಮತ್ತು ಸಿ ವೈರಸ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯವಾದ ವೈರಲ್ ರೋಗಕಾರಕಗಳಾಗಿವೆ.ಮಾನವನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ಪರಾವಲಂಬಿಗಳು ಸಂಭಾವ್ಯ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತವೆ.ಹಲವಾರು ಪರಾವಲಂಬಿ ಜಾತಿಗಳು, ಅವುಗಳೆಂದರೆ ಸ್ಕಿಸ್ಟೋಸೋಮಾ, ಒಪಿಶೋರ್ಚಿಸ್ ವಿವರ್ರಿನಿ, ಒ. ಫೆಲಿನಿಯಸ್, ಕ್ಲೋನೋರ್ಚಿಸ್ ಸಿನೆನ್ಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಹೈಮೆನೋಲೆಪಿಸ್ ನಾನಾ, ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಮಾನವ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ 6,7,8 ರಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿವೆ.
ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿಯು ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರೊಟೊಜೋವನ್ ಆಗಿದ್ದು ಅದು ಸೋಂಕಿತ ಹೋಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪರಿಸರವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಪರಾವಲಂಬಿಯು ಪ್ರಪಂಚದ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ ಸರಿಸುಮಾರು 30% ನಷ್ಟು ಜನರಿಗೆ ಸೋಂಕು ತಗುಲುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಂದಾಜಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಇಡೀ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಅಪಾಯಕ್ಕೆ ಒಳಪಡಿಸುತ್ತದೆ9,10.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿಯು ಕೇಂದ್ರ ನರಮಂಡಲದ (ಸಿಎನ್ಎಸ್) ಸೇರಿದಂತೆ ಪ್ರಮುಖ ಅಂಗಗಳಿಗೆ ಸೋಂಕು ತರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮಾರಣಾಂತಿಕ ಮೆನಿಂಜೈಟಿಸ್ ಮತ್ತು ಎನ್ಸೆಫಾಲಿಟಿಸ್ನಂತಹ ಗಂಭೀರ ಕಾಯಿಲೆಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಇಮ್ಯುನೊಕೊಂಪ್ರೊಮೈಸ್ಡ್ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ9.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿಯು ರೋಗನಿರೋಧಕ ಶಕ್ತಿ ಹೊಂದಿರುವ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸೋಂಕಿತ ಹೋಸ್ಟ್‌ನ ಪರಿಸರವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು, ಇದು ಲಕ್ಷಣರಹಿತ ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಸೋಂಕಿನ ನಿರ್ವಹಣೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, T. ಗೊಂಡಿ ಹರಡುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಸಂಭವದ ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ನೀಡಲಾಗಿದೆ, ದೀರ್ಘಕಾಲದ T. ಗೊಂಡಿ ಸೋಂಕಿನಿಂದಾಗಿ vivo ಹೋಸ್ಟ್ ಪರಿಸರ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪರಿಸರವನ್ನು ಹೋಲುತ್ತವೆ ಎಂದು ಕೆಲವು ವರದಿಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.
ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಇಂಟರ್ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಸಂವಹನಕಾರರು ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅದು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಜೈವಿಕ ವಿಷಯವನ್ನು ನೆರೆಯ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ತಲುಪಿಸುತ್ತದೆ16,17.ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಗೆಡ್ಡೆ-ಸಂಬಂಧಿತ ಜೈವಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಾದ ಆಂಟಿ-ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್, ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿನ ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವ ಬೀರಬಹುದು.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, miRNAಗಳು (miRNAಗಳು), ಸಣ್ಣ ಕೋಡಿಂಗ್ ಅಲ್ಲದ RNAಗಳು ಸುಮಾರು 22 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳು, ಪ್ರಮುಖವಾದ ನಂತರದ ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಜೀನ್ ನಿಯಂತ್ರಕಗಳಾಗಿವೆ, ಇದು miRNA-ಪ್ರೇರಿತ ಸೈಲೆನ್ಸಿಂಗ್ ಕಾಂಪ್ಲೆಕ್ಸ್ (miRISC) ಮೂಲಕ ಮಾನವನ mRNA ಯ 30% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿಯು ಸೋಂಕಿತ ಅತಿಥೇಯಗಳಲ್ಲಿ miRNA ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಜೈವಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ.ಆತಿಥೇಯ ಮೈಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳು ಪರಾವಲಂಬಿ ಬದುಕುಳಿಯುವ ತಂತ್ರವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಹೋಸ್ಟ್ ಜೈವಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಪ್ರಮುಖ ಸಂಕೇತಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.ಹೀಗಾಗಿ, T. ಗೊಂಡಿಯ ಸೋಂಕಿನ ಮೇಲೆ ಹೋಸ್ಟ್ miRNA ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ನಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡುವುದು ಹೋಸ್ಟ್ ಮತ್ತು T. ಗೊಂಡಿ ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ನಮಗೆ ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ತಿರುಜ್ಞಾನಮ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.15 ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಹೋಸ್ಟ್ ಮೈಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳ ಮೇಲೆ ಅದರ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಟಿ.ಗೊಂಡಿ ಮೆದುಳಿನ ಕಾರ್ಸಿನೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಟಿ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ BV2 ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾದ ಅತಿಥೇಯ ಮೈಕ್ರೊಗ್ಲಿಯಾದಲ್ಲಿ ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ miR-21 ನ ಬದಲಾವಣೆಯ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸುತ್ತದೆ.FoxO1/p27 ನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿನ ಧಾರಣದಿಂದಾಗಿ U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ಬದಲಾದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ miR-21 ನ ಸಂಭವನೀಯ ಪಾತ್ರವನ್ನು ನಾವು ಗಮನಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಇದು ಮಿತಿಮೀರಿದ miR-21 ನ ಗುರಿಯಾಗಿದೆ.
BV2 ನಿಂದ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್ ಬಳಸಿ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಘಟಕಗಳು ಅಥವಾ ಇತರ ಕೋಶಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ವಿವಿಧ ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಮೌಲ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.SDS-ಪಾಲಿಯಕ್ರಿಲಾಮೈಡ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ (SDS-PAGE) BV2 ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಂದ (ಚಿತ್ರ 1A) ಹೊರತೆಗೆಯಲಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ವಿಭಿನ್ನ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ ಮತ್ತು ಅಲಿಕ್ಸ್‌ನ ಉಪಸ್ಥಿತಿಗಾಗಿ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದನ್ನು ಪಾಶ್ಚಾತ್ಯ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್‌ನಿಂದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳ ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ಅಲಿಕ್ಸ್ ಲೇಬಲಿಂಗ್ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ ಆದರೆ BV2 ಸೆಲ್ ಲೈಸೇಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅಲ್ಲ (Fig. 1B).ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, BV2 ನಿಂದ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ RNA ಅನ್ನು ಜೈವಿಕ ವಿಶ್ಲೇಷಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.18S ಮತ್ತು 28S ರೈಬೋಸೋಮಲ್ ಉಪಘಟಕಗಳನ್ನು ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ವಲಸೆ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ವಿರಳವಾಗಿ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 1 ಸಿ).ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಪ್ರಸರಣ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವು ಗಮನಿಸಿದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಸುಮಾರು 60-150 nm ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿವೆ ಮತ್ತು ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನದ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಕಪ್-ರೀತಿಯ ರಚನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ (Fig. 1D).
BV2 ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಗುಣಲಕ್ಷಣ.(A) ಸುರಕ್ಷತೆ ಡೇಟಾ ಶೀಟ್ ಪುಟ.BV2 ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಅಥವಾ BV2 ನಿಂದ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ.ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ನಡುವೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾದರಿಗಳು ಭಿನ್ನವಾಗಿರುತ್ತವೆ.(ಬಿ) ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ ಮಾರ್ಕರ್‌ನ ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ಅಲಿಕ್ಸ್).(C) ಜೈವಿಕ ವಿಶ್ಲೇಷಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು BV2 ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು BV2 ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ RNA ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ.ಹೀಗಾಗಿ, BV2 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ 18S ಮತ್ತು 28S ರೈಬೋಸೋಮಲ್ ಉಪಘಟಕಗಳು ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯಲ್ಲಿ ವಿರಳವಾಗಿ ಕಂಡುಬಂದಿವೆ.(D) ಟ್ರಾನ್ಸ್ಮಿಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ BV2 ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್ಗಳು 2% ಯುರೇನಿಲ್ ಅಸಿಟೇಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ.ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಸರಿಸುಮಾರು 60-150 nm ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕಪ್ ಆಕಾರದಲ್ಲಿರುತ್ತವೆ (ಸಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಜಂಗ್, ಅಪ್ರಕಟಿತ ಡೇಟಾ).
U87 ಹ್ಯೂಮನ್ ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳಾಗಿ BV2-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಆಂತರಿಕೀಕರಣವನ್ನು ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ ಬಳಸಿ ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.PKH26 ಲೇಬಲ್ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು U87 ಜೀವಕೋಶಗಳ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂನಲ್ಲಿ ಸ್ಥಳೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು DAPI (Fig. 2A) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಹೋಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳಿಂದ ಆಂತರಿಕಗೊಳಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸ್ವೀಕರಿಸುವವರ ಕೋಶಗಳ ಪರಿಸರದ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವ ಬೀರಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳಾಗಿ BV2-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಆಂತರಿಕೀಕರಣ ಮತ್ತು ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ RH ಸೋಂಕಿತ BV2-ಉತ್ಪನ್ನ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ.(A) ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯಿಂದ ಅಳೆಯಲಾದ U87 ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಆವರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ.U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳನ್ನು PKH26 (ಕೆಂಪು) ನೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ 24 ಗಂಟೆಗಳವರೆಗೆ ನಿಯಂತ್ರಣವಿಲ್ಲದೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು DAPI (ನೀಲಿ) ಯೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ವೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್: 10 μm, x 3000).(B) U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಸರಣ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿದೆ.U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸಿದ ಸಮಯಕ್ಕೆ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು. *P <0.05 ಅನ್ನು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. *P <0.05 ಅನ್ನು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. *P < 0,05 по t-критерию Стьюдента. ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ *P <0.05. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *ಪಿ <0.05 * P < 0,05, ಪೋಲುಚೆನ್ನಿ ಸ್ ಪೊಮೊಶ್ಯು ಟಿ-ಕ್ರೈಟೆರಿಯಾ ಸ್ಟೌಡ್. * P <0.05 ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.
U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳಾಗಿ BV2-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಆಂತರಿಕೀಕರಣವನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸಿದ ನಂತರ, ಮಾನವ ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ BV2- ಪಡೆದ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಪಾತ್ರವನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಲು ನಾವು ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಸರಣ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ.T. ಗೊಂಡಿ-ಸೋಂಕಿತ BV2 ಕೋಶಗಳಿಂದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ U87 ಕೋಶಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು T. ಗೊಂಡಿ-ಸೋಂಕಿತ BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ U87 ಕೋಶಗಳ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ (Fig. 2B).
ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, U118 ಜೀವಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯು U87 ನಂತೆಯೇ ಅದೇ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತು, ಏಕೆಂದರೆ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಉತ್ತೇಜಿತ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಿದವು (ಡೇಟಾವನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ).ಈ ಡೇಟಾವನ್ನು ಆಧರಿಸಿ, ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣದಲ್ಲಿ BV2- ಪಡೆದ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ-ಸೋಂಕಿತ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ನಾವು ಸೂಚಿಸಬಹುದು.
ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ-ಸೋಂಕಿತ BV2-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಲು, ನಾವು ಕ್ಸೆನೋಗ್ರಾಫ್ಟ್ ಮಾದರಿಗಾಗಿ U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳನ್ನು ನಗ್ನ ಇಲಿಗಳಿಗೆ ಚುಚ್ಚಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಅಥವಾ RH- ಸೋಂಕಿತ BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಚುಚ್ಚಿದ್ದೇವೆ.1 ವಾರದ ನಂತರ ಗೆಡ್ಡೆಗಳು ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ನಂತರ, 5 ಇಲಿಗಳ ಪ್ರತಿ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಗುಂಪನ್ನು ಅದೇ ಆರಂಭಿಕ ಹಂತವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಗಾತ್ರಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಗಾತ್ರವನ್ನು 22 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.
U87 ಕ್ಸೆನೋಗ್ರಾಫ್ಟ್ ಮಾದರಿಯೊಂದಿಗೆ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ, BV2-ಪಡೆದ RH-ಸೋಂಕಿತ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ದಿನ 22 (Fig. 3A,B) ನಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ದೊಡ್ಡ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ತೂಕವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನ ನಡುವೆ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸವಿಲ್ಲ.ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನ ಇಲಿಗಳು RH- ಸೋಂಕಿತ BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ದೊಡ್ಡ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ದೃಷ್ಟಿಗೋಚರವಾಗಿ ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ (Fig. 3C).ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು BV2-ಪಡೆದ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ-ಸೋಂಕಿತ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಮೌಸ್ ಟ್ಯೂಮರ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
U87 ಕ್ಸೆನೋಗ್ರಾಫ್ಟ್ ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಆಂಕೊಜೆನೆಸಿಸ್ (AC).BV2 ನಿಂದ ಪಡೆದ RH-ಸೋಂಕಿತ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ BALB/c ನಗ್ನ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಗಾತ್ರ (A) ಮತ್ತು ತೂಕ (B) ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು.BALB/c ನಗ್ನ ಇಲಿಗಳನ್ನು (C) ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ಮಿಶ್ರಣದಲ್ಲಿ ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸಲಾದ 1 x 107 U87 ಜೀವಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಬ್ಕ್ಯುಟೇನಿಯಸ್ ಆಗಿ ಚುಚ್ಚಲಾಯಿತು.ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನ ಆರು ದಿನಗಳ ನಂತರ, 100 μg BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು.ಗೆಡ್ಡೆಯ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ತೂಕವನ್ನು ಸೂಚಿಸಿದ ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ತ್ಯಾಗದ ನಂತರ ಕ್ರಮವಾಗಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. *ಪಿ <0.05. *ಪಿ <0.05. *ಆರ್ <0,05. *ಪಿ <0.05. *ಪಿ <0.05. *ಪಿ <0.05. *ಆರ್ <0,05. *ಪಿ <0.05.
ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ RH ಸ್ಟ್ರೈನ್ (Fig. 4A) ಸೋಂಕಿನ ನಂತರ ಮೈಕ್ರೊಗ್ಲಿಯಾದಲ್ಲಿ ರೋಗನಿರೋಧಕ ಶಕ್ತಿ ಅಥವಾ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ 37 miRNA ಗಳು (16 ಅತಿಯಾದ ಒತ್ತಡ ಮತ್ತು 21 ಕಡಿಮೆ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದವು) ಎಂದು ಡೇಟಾ ತೋರಿಸಿದೆ.ಬದಲಾದ miRNA ಗಳಲ್ಲಿ miR-21 ನ ಸಾಪೇಕ್ಷ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟಗಳು BV2 ನಿಂದ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ನೈಜ-ಸಮಯದ RT-PCR ನಿಂದ ದೃಢೀಕರಿಸಲ್ಪಟ್ಟವು, BV2 ಮತ್ತು U87 ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು.miR-21 ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯು ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿ (RH ಸ್ಟ್ರೈನ್) (Fig. 4B) ಸೋಂಕಿತ BV2 ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ.ಬದಲಾದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಂಡ ನಂತರ BV2 ಮತ್ತು U87 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ miR-21 ನ ಸಾಪೇಕ್ಷ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟಗಳು ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು (Fig. 4B).ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿ (ME49 ಸ್ಟ್ರೈನ್) ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾದ ಗೆಡ್ಡೆಯ ರೋಗಿಗಳು ಮತ್ತು ಇಲಿಗಳ ಮಿದುಳಿನ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ miR-21 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಸಾಪೇಕ್ಷ ಮಟ್ಟಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿವೆ (Fig. 4C).ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ವಿಟ್ರೊ ಮತ್ತು ವಿವೋದಲ್ಲಿನ ಭವಿಷ್ಯ ಮತ್ತು ದೃಢಪಡಿಸಿದ ಮೈಕ್ರೋಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳೊಂದಿಗೆ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ.
ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿ (RH) ಸೋಂಕಿತ ಮೈಕ್ರೊಗ್ಲಿಯಾದಲ್ಲಿ ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ miP-21a-5p ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆಗಳು.(A) T. ಗೊಂಡಿ RH ಸೋಂಕಿನ ನಂತರ ರೋಗನಿರೋಧಕ ಶಕ್ತಿ ಅಥವಾ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ siRNA ಯಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ.(B) BV2-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು, BV2-ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಮತ್ತು U87 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ನೈಜ-ಸಮಯದ RT-PCR ನಿಂದ ಸಂಬಂಧಿತ miR-21 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಗಿದೆ.(C) ಟ್ಯೂಮರ್ ರೋಗಿಗಳ ಮೆದುಳಿನ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ (N=3) ಮತ್ತು ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿ (ME49 ಸ್ಟ್ರೈನ್) (N=3) ಸೋಂಕಿತ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಪೇಕ್ಷ miR-21 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟಗಳು ಕಂಡುಬಂದಿವೆ. *P <0.05 ಅನ್ನು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. *P <0.05 ಅನ್ನು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 ಅನ್ನು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *ಪಿ <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.
RH-ಸೋಂಕಿತ BV2 ಕೋಶಗಳಿಂದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ವಿವೋ ಮತ್ತು ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಗ್ಲಿಯೊಮಾಸ್‌ನ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು (ಚಿತ್ರ 2, 3).ಸಂಬಂಧಿತ mRNAಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು, BV2 ಅಥವಾ RH BV2 ನಿಂದ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಂದ ಸೋಂಕಿತವಾಗಿರುವ U87 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಆಂಟಿಟ್ಯೂಮರ್ ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಜೀನ್‌ಗಳು, ಫೋರ್ಕ್‌ಹೆಡ್ ಬಾಕ್ಸ್ O1 (FoxO1), PTEN ಮತ್ತು ಪ್ರೋಗ್ರಾಮ್ ಮಾಡಲಾದ ಸೆಲ್ ಡೆತ್ 4 (PDCD4) ನ mRNA ಮಟ್ಟವನ್ನು ನಾವು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ.FoxO1, PTEN ಮತ್ತು PDCD4 ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಹಲವಾರು ಗೆಡ್ಡೆ-ಸಂಬಂಧಿತ ಜೀನ್‌ಗಳು miR-2121,22 ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಸೈಟ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ಬಯೋಇನ್ಫರ್ಮ್ಯಾಟಿಕ್ಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ತೋರಿಸಿದೆ.BV2-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಗೆ (Fig. 5A) ಹೋಲಿಸಿದರೆ RH- ಸೋಂಕಿತ BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಆಂಟಿಟ್ಯೂಮರ್ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗಳ mRNA ಮಟ್ಟವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.FoxO1 BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ RH- ಸೋಂಕಿತ BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 5B).ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, RH-ಸೋಂಕಿತ BV2 ನಿಂದ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು ಆಂಟಿ-ಆಂಕೊಜೆನಿಕ್ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ತಮ್ಮ ಪಾತ್ರವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ನಾವು ಖಚಿತಪಡಿಸಬಹುದು.
ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ RH-ಸೋಂಕಿತ BV2-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ RH-ಸೋಂಕಿತ BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಂದ ಆಂಟಿಟ್ಯೂಮರ್ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುತ್ತವೆ.(A) PBS ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ T. gondii RH-ಸೋಂಕಿತ BV2 ನಿಂದ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ FoxO1, PTEN ಮತ್ತು PDCD4 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ನೈಜ-ಸಮಯದ PCR.β-ಆಕ್ಟಿನ್ mRNA ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.(B) FoxO1 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್‌ನಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇಮೇಜ್‌ಜೆ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಡೆನ್ಸಿಟೋಮೆಟ್ರಿ ಡೇಟಾವನ್ನು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. *P <0.05 ಅನ್ನು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. *P <0.05 ಅನ್ನು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 ಅನ್ನು ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *ಪಿ <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.
ಗೆಡ್ಡೆ-ಸಂಬಂಧಿತ ಜೀನ್ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಮೇಲೆ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ miP-21 ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು, Lipofectamine 2000 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು U87 ಕೋಶಗಳನ್ನು miP-21 ನ ಪ್ರತಿರೋಧಕದೊಂದಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ವರ್ಗಾವಣೆ ಮಾಡಿದ 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಲಾಯಿತು.miR-21 ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳೊಂದಿಗೆ ವರ್ಗಾವಣೆಗೊಂಡ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ FoxO1 ಮತ್ತು p27 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು qRT-PCR (Fig. 6A,B) ಬಳಸಿಕೊಂಡು BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗಿದೆ.U87 ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ miR-21 ಪ್ರತಿಬಂಧಕದ ವರ್ಗಾವಣೆಯು FoxO1 ಮತ್ತು p27 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಿತು (FIG. 6).
RH-ಸೋಂಕಿತ ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ BV2- ಪಡೆದ miP-21 U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ FoxO1/p27 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿತು.U87 ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಲಿಪೊಫೆಕ್ಟಮೈನ್ 2000 ಬಳಸಿಕೊಂಡು miP-21 ಪ್ರತಿಬಂಧಕದೊಂದಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕೋಶಗಳನ್ನು ವರ್ಗಾವಣೆ ಮಾಡಿದ 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಲಾಯಿತು.miR-21 ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳೊಂದಿಗೆ ವರ್ಗಾವಣೆಗೊಂಡ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ FoxO1 ಮತ್ತು p27 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು qRT-PCR (A, B) ಬಳಸಿಕೊಂಡು BV2- ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಮಟ್ಟಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಆತಿಥೇಯರ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಿಂದ ತಪ್ಪಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಪರಾವಲಂಬಿ ಅಂಗಾಂಶದ ಚೀಲವಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.ಅವರು ಆತಿಥೇಯರ ಜೀವಿತಾವಧಿಯಲ್ಲಿ ಮೆದುಳು, ಹೃದಯ ಮತ್ತು ಅಸ್ಥಿಪಂಜರದ ಸ್ನಾಯು ಸೇರಿದಂತೆ ವಿವಿಧ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು ಪರಾವಲಂಬಿಗೊಳಿಸುತ್ತಾರೆ ಮತ್ತು ಆತಿಥೇಯರ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುತ್ತಾರೆ.ಜೊತೆಗೆ, ಅವರು ಜೀವಕೋಶದ ಚಕ್ರವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಆತಿಥೇಯ ಕೋಶಗಳ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್, ಅವುಗಳ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ14,24.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿಯು ಪ್ರಧಾನವಾಗಿ ಆತಿಥೇಯ ಡೆಂಡ್ರಿಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳು, ನ್ಯೂಟ್ರೋಫಿಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಮೆದುಳಿನ ಮೈಕ್ರೋಗ್ಲಿಯಾ ಸೇರಿದಂತೆ ಮೊನೊಸೈಟ್/ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್ ವಂಶಾವಳಿಯನ್ನು ಸೋಂಕು ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿ M2 ಫಿನೋಟೈಪ್‌ನ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ, ರೋಗಕಾರಕ ಸೋಂಕಿನ ನಂತರ ಗಾಯದ ಗುಣಪಡಿಸುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೈಪರ್‌ವಾಸ್ಕುಲರೈಸೇಶನ್ ಮತ್ತು ಗ್ರ್ಯಾನುಲೋಮಾಟಸ್ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಹ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸೋಂಕಿನ ಈ ವರ್ತನೆಯ ರೋಗಕಾರಕವು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಗುರುತುಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿರಬಹುದು.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾದಿಂದ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲ್ಪಡುವ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಪರಿಸರವು ಅನುಗುಣವಾದ ಪೂರ್ವ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಅನ್ನು ಹೋಲುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸೋಂಕು ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡಬೇಕು ಎಂದು ಊಹಿಸಬಹುದು.ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ವಿವಿಧ ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ರೋಗಿಗಳ ಸೀರಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸೋಂಕಿನ ಹೆಚ್ಚಿನ ದರಗಳು ವರದಿಯಾಗಿವೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿಯು ಮತ್ತೊಂದು ಕಾರ್ಸಿನೋಜೆನಿಕ್ ಎಫೆಕ್ಟರ್ ಆಗಿರಬಹುದು ಮತ್ತು ಇತರ ಸಾಂಕ್ರಾಮಿಕ ಕಾರ್ಸಿನೋಜೆನ್‌ಗಳು ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡಲು ಸಿನರ್ಜಿಸ್ಟಿಕ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು.ಈ ನಿಟ್ಟಿನಲ್ಲಿ, P. ಫಾಲ್ಸಿಪ್ಯಾರಮ್ ಮತ್ತು ಎಪ್ಸ್ಟೀನ್-ಬಾರ್ ವೈರಸ್ ಬರ್ಕಿಟ್ನ ಲಿಂಫೋಮಾದ ರಚನೆಗೆ ಸಿನರ್ಜಿಸ್ಟಿಕ್ ಆಗಿ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುತ್ತವೆ ಎಂದು ಗಮನಿಸಬೇಕಾದ ಅಂಶವಾಗಿದೆ.
ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಸಂಶೋಧನೆಯ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ನಿಯಂತ್ರಕರಾಗಿ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ತನಿಖೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಪರಾವಲಂಬಿಗಳು ಮತ್ತು ಸೋಂಕಿತ ಅತಿಥೇಯಗಳ ನಡುವಿನ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿಲ್ಲ.ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, ಸ್ರವಿಸುವ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ವಿವಿಧ ನಿಯಂತ್ರಕರು, ಪ್ರೊಟೊಜೋವನ್ ಪರಾವಲಂಬಿಗಳು ಅತಿಥೇಯ ದಾಳಿಯನ್ನು ಪ್ರತಿರೋಧಿಸುವ ಮತ್ತು ಸೋಂಕನ್ನು ಶಾಶ್ವತಗೊಳಿಸುವ ಜೈವಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ವಿವರಿಸಿದ್ದಾರೆ.ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, ಪ್ರೊಟೊಜೋವನ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಮೈಕ್ರೋವೆಸಿಕಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಮೈಕ್ರೊಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳು ತಮ್ಮ ಉಳಿವಿಗಾಗಿ ಅನುಕೂಲಕರ ವಾತಾವರಣವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸಲು ಹೋಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುತ್ತವೆ ಎಂಬ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯು ಬೆಳೆಯುತ್ತಿದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಬದಲಾದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ ಮೈಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳು ಮತ್ತು ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣದ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.ಮೈಕ್ರೋಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಬದಲಾವಣೆ (ಕ್ಲಸ್ಟರ್ ಜೀನ್‌ಗಳು miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 ಮತ್ತು miR-17-92) ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ-ಸೋಂಕಿತ ಮಾನವ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ STAT3 ಪ್ರವರ್ತಕಕ್ಕೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ನಿಯಂತ್ರಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಚೋದಿಸುತ್ತದೆ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿ ಸೋಂಕಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ 29 .ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸೋಂಕು miR-17-5p ಮತ್ತು miR-106b-5p ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಹಲವಾರು ಹೈಪರ್‌ಪ್ರೊಲಿಫೆರೇಟಿವ್ ಕಾಯಿಲೆಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ 30 .ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸೋಂಕಿನಿಂದ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲ್ಪಡುವ ಹೋಸ್ಟ್ ಮೈಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳು ಪರಾವಲಂಬಿ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಹೋಸ್ಟ್ ಜೈವಿಕ ನಡವಳಿಕೆಯಲ್ಲಿ ರೋಗಕಾರಕಕ್ಕೆ ಪ್ರಮುಖ ಅಣುಗಳಾಗಿವೆ ಎಂದು ಈ ಡೇಟಾ ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಬದಲಾದ ಮೈಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳು ಗ್ಲಿಯೊಮಾಸ್ ಸೇರಿದಂತೆ ಮಾರಣಾಂತಿಕ ಕೋಶಗಳ ಪ್ರಾರಂಭ ಮತ್ತು ಪ್ರಗತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ನಡವಳಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವ ಬೀರಬಹುದು: ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಸಂಕೇತಗಳ ಸ್ವಯಂಪೂರ್ಣತೆ, ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ತಡೆಯುವ ಸಂಕೇತಗಳಿಗೆ ಸಂವೇದನಾಶೀಲತೆ, ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ತಪ್ಪಿಸಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ, ಅನಿಯಮಿತ ಪ್ರತಿಕೃತಿ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ, ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್, ಆಕ್ರಮಣ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತ.ಗ್ಲಿಯೋಮಾದಲ್ಲಿ, ಹಲವಾರು ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ ಬದಲಾದ miRNA ಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ-ಸೋಂಕಿತ ಹೋಸ್ಟ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ miRNA-21 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಾವು ದೃಢಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ.miR-21 ಅನ್ನು ಗ್ಲಿಯೊಮಾಸ್, 33 ಸೇರಿದಂತೆ ಘನ ಗೆಡ್ಡೆಗಳಲ್ಲಿ ಅತಿಯಾಗಿ ಒತ್ತಿದ ಮೈಕ್ರೋಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದೆಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಗ್ಲಿಯೋಮಾದ ದರ್ಜೆಯೊಂದಿಗೆ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ.miR-21 ಒಂದು ಕಾದಂಬರಿ ಆಂಕೊಜೀನ್ ಆಗಿದ್ದು ಅದು ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್-ವಿರೋಧಿ ಅಂಶವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮಾನವನ ಮೆದುಳಿನ ಮಾರಕತೆಗಳ ಅಂಗಾಂಶಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ಲಾಸ್ಮಾದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಒತ್ತಡಕ್ಕೊಳಗಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಪುರಾವೆಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸುವುದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ miR-21 ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-ಅವಲಂಬಿತ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ನ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಜೀವಕೋಶದ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.miR-21 ಊಹಿಸಿದ ಗುರಿಗಳ ಬಯೋಇನ್‌ಫರ್ಮ್ಯಾಟಿಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು miR-2121 ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಸೈಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರೋಗ್ರಾಮ್ಡ್ ಸೆಲ್ ಡೆತ್ 4 (PDCD4), ಟ್ರೋಪೊಮಿಯೊಸಿನ್ (TPM1), PTEN, ಮತ್ತು ಫೋರ್ಕ್‌ಹೆಡ್ ಬಾಕ್ಸ್ O1 (FoxO1) ಸೇರಿದಂತೆ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಮಾರ್ಗಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಬಹು ಟ್ಯೂಮರ್ ಸಪ್ರೆಸರ್ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು..22.38.
FoxO1, ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಅಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿ (FoxO), ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಮಾನವ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ ಮತ್ತು p21, p27, Bim ಮತ್ತು FasL40 ನಂತಹ ಟ್ಯೂಮರ್ ಸಪ್ರೆಸರ್ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಬಹುದು.FoxO1 ಜೀವಕೋಶದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸಲು p27 ನಂತಹ ಜೀವಕೋಶದ ಚಕ್ರ ಪ್ರತಿಬಂಧಕಗಳನ್ನು ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ಇದಲ್ಲದೆ, FoxO1 PI3K/Akt ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ಪ್ರಮುಖ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು p2742 ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಮೂಲಕ ಜೀವಕೋಶದ ಚಕ್ರದ ಪ್ರಗತಿ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ವ್ಯತ್ಯಾಸದಂತಹ ಅನೇಕ ಜೈವಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ.
ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ-ಸೋಂಕಿತ ಮೈಕ್ರೊಗ್ಲಿಯಾದಿಂದ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ miR-21 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಿಯಂತ್ರಕವಾಗಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ನಂಬುತ್ತೇವೆ (ಚಿತ್ರ 7).ಆದಾಗ್ಯೂ, ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ miR-21, ಬದಲಾದ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸೋಂಕು ಮತ್ತು ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ನಡುವಿನ ನೇರ ಸಂಪರ್ಕವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸೋಂಕು ಮತ್ತು ಗ್ಲಿಯೊಮಾದ ಸಂಭವದ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಆರಂಭಿಕ ಹಂತವನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ನಿರೀಕ್ಷೆಯಿದೆ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಗ್ಲಿಯೋಮಾ (ಮೆದುಳು) ಕಾರ್ಸಿನೋಜೆನೆಸಿಸ್‌ನ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಸ್ಕೀಮ್ಯಾಟಿಕ್ ರೇಖಾಚಿತ್ರವನ್ನು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ.ಲೇಖಕರು PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA) ನಲ್ಲಿ ಚಿತ್ರಿಸಿದ್ದಾರೆ.
ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿನ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗಳು ಸಿಯೋಲ್ ನ್ಯಾಷನಲ್ ಯೂನಿವರ್ಸಿಟಿ ಅನಿಮಲ್ ಕೇರ್ ಮತ್ತು ಯೂಸರ್ ಕಮಿಟಿ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಎಥಿಕಲ್ ಗೈಡ್‌ಲೈನ್‌ಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಸಿಯೋಲ್ ನ್ಯಾಷನಲ್ ಯೂನಿವರ್ಸಿಟಿ ಸ್ಕೂಲ್ ಆಫ್ ಮೆಡಿಸಿನ್‌ನ ಸಾಂಸ್ಥಿಕ ವಿಮರ್ಶೆ ಮಂಡಳಿಯಿಂದ ಅನುಮೋದಿಸಲಾಗಿದೆ (IRB ಸಂಖ್ಯೆ SNU- 150715).-2).ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ARRIVE ಶಿಫಾರಸುಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
BV2 ಮೌಸ್ ಮೈಕ್ರೊಗ್ಲಿಯಾ ಮತ್ತು U87 ಮಾನವ ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಡುಲ್ಬೆಕೊಸ್ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಈಗಲ್ಸ್ ಮೀಡಿಯಂ (DMEM; ವೆಲ್ಗೆನ್, ಸಿಯೋಲ್, ಕೊರಿಯಾ) ಮತ್ತು ರೋಸ್ವೆಲ್ ಪಾರ್ಕ್ ಮೆಮೋರಿಯಲ್ ಇನ್‌ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್‌ನ ಮಧ್ಯಮ (RPMI; ವೆಲ್ಜೀನ್) ಕ್ರಮವಾಗಿ 10% ಭ್ರೂಣದ ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್, 4 ಮಿ.ಮೀ. ಗ್ಲುಟಾಮಿನ್, 0.2 mM ಪೆನ್ಸಿಲಿನ್ ಮತ್ತು 0.05 mM ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಿನ್.37 ° C ನಲ್ಲಿ 5% CO2 ನೊಂದಿಗೆ ಅಕ್ಷಯಪಾತ್ರೆಗೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.ಮತ್ತೊಂದು ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಸೆಲ್ ಲೈನ್, U118 ಅನ್ನು U87 ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು.
T. ಗೊಂಡಿ-ಸೋಂಕಿತ RH ಮತ್ತು ME49 ತಳಿಗಳಿಂದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು, 3-4 ದಿನಗಳ ಮೊದಲು ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನ 6 ವಾರಗಳ ವಯಸ್ಸಿನ BALB/c ಇಲಿಗಳ ಕಿಬ್ಬೊಟ್ಟೆಯ ಕುಹರದಿಂದ T. ಗೊಂಡಿ ಟಾಕಿಜೋಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು (RH ಸ್ಟ್ರೈನ್) ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಲಾಯಿತು.Tachyzoites PBS ನೊಂದಿಗೆ ಮೂರು ಬಾರಿ ತೊಳೆದು 40% ಪರ್ಕಾಲ್ (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, ಸೇಂಟ್ ಲೂಯಿಸ್, MO, USA) 43 ರಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮೂಲಕ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು.ಸ್ಟ್ರೈನ್ ME49 ನ ಟ್ಯಾಕಿಜೋಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು, BALB/c ಇಲಿಗಳನ್ನು 20 ಅಂಗಾಂಶದ ಚೀಲಗಳೊಂದಿಗೆ ಇಂಟ್ರಾಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಆಗಿ ಚುಚ್ಚಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸೋಂಕಿನ ನಂತರ 6-8 ನೇ ದಿನದಂದು (PI) ಕಿಬ್ಬೊಟ್ಟೆಯ ಕುಹರವನ್ನು ತೊಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ಚೀಲಗಳಲ್ಲಿನ ಟ್ಯಾಕಿಜೋಯಿಟ್ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಇಲಿಗಳು ಪಿಬಿಎಸ್ ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾಗಿವೆ.100 μg/ml ಪೆನಿಸಿಲಿನ್ (ಗಿಬ್ಕೊ/BRL, ಗ್ರ್ಯಾಂಡ್ ಐಲ್ಯಾಂಡ್, NY, USA), 100 μg/ml ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಿನ್ (ಗಿಬ್ಕೊ/BRL), ಮತ್ತು 5% ಭ್ರೂಣದ ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್ (ಲೋನ್ಜಾ, ವಾಲ್ಕರ್ಸ್) ನೊಂದಿಗೆ ಪೂರಕವಾದ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ME49 ಟ್ಯಾಕಿಜೋಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು. .., USA) 37 °C ಮತ್ತು 5% ಇಂಗಾಲದ ಡೈಆಕ್ಸೈಡ್.ವೆರೋ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕೃಷಿ ಮಾಡಿದ ನಂತರ, ME49 ಟ್ಯಾಕಿಜೋಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಎರಡು ಬಾರಿ 25 ಗೇಜ್ ಸೂಜಿಯ ಮೂಲಕ ರವಾನಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ 5 µm ಫಿಲ್ಟರ್ ಮೂಲಕ ಶಿಲಾಖಂಡರಾಶಿಗಳು ಮತ್ತು ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ.ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ, ಟ್ಯಾಕಿಜೋಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು PBS44 ನಲ್ಲಿ ಮರುಜೋಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸೋಂಕಿತ C57BL/6 ಇಲಿಗಳ (ಓರಿಯಂಟ್ ಬಯೋ ಅನಿಮಲ್ ಸೆಂಟರ್, ಸಿಯೋಂಗ್ನಮ್, ಕೊರಿಯಾ) ಮೆದುಳಿನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ ಚೀಲಗಳ ಇಂಟ್ರಾಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಮೂಲಕ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ME49 ನ ಅಂಗಾಂಶ ಚೀಲಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ME49-ಸೋಂಕಿತ ಇಲಿಗಳ ಮಿದುಳುಗಳನ್ನು 3 ತಿಂಗಳ PI ನಂತರ ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಚೀಲಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಕೊಚ್ಚಿದ.ಸೋಂಕಿತ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಸಿಯೋಲ್ ನ್ಯಾಷನಲ್ ಯೂನಿವರ್ಸಿಟಿ ಸ್ಕೂಲ್ ಆಫ್ ಮೆಡಿಸಿನ್‌ನಲ್ಲಿ ವಿಶೇಷ ರೋಗಕಾರಕ-ಮುಕ್ತ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (SPF) ಇರಿಸಲಾಗಿತ್ತು.
ತಯಾರಕರ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು BV2-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳು, BV2 ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಂದ ಒಟ್ಟು RNA ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಗಿದೆ, ಎಲುಷನ್ ಹಂತಕ್ಕೆ ಕಾವು ಸಮಯ ಸೇರಿದಂತೆ.ನ್ಯಾನೊಡ್ರಾಪ್ 2000 ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.ಆರ್ಎನ್ಎ ಮೈಕ್ರೋಅರೇಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಎಜಿಲೆಂಟ್ 2100 ಬಯೋಅನಾಲೈಜರ್ (ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್, ಆಮ್ಸ್ಟೆಲ್ವೀನ್, ನೆದರ್ಲ್ಯಾಂಡ್ಸ್) ಬಳಸಿ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗಿದೆ.
10% ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್-ಕಳಪೆ FBS ನೊಂದಿಗೆ DMEM ಅನ್ನು 100,000g ನಲ್ಲಿ ಅಲ್ಟ್ರಾಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್ ಮೂಲಕ 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 4 ° C ನಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 0.22 µm ಫಿಲ್ಟರ್ ಮೂಲಕ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ (ನಲ್ಜೀನ್, ರೋಚೆಸ್ಟರ್, NY, USA).BV2 ಕೋಶಗಳು, 5 × 105, DMEM ನಲ್ಲಿ 10% ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್-ಡಿಪ್ಲಿಟೆಡ್ FBS ಮತ್ತು 1% ಪ್ರತಿಜೀವಕಗಳನ್ನು 37 ° C ಮತ್ತು 5% CO2 ನಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ, ಸ್ಟ್ರೈನ್ RH ಅಥವಾ ME49 (MOI = 10) ನ ಟಾಕಿಜೋಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಆಕ್ರಮಣ ಮಾಡದ ಪರಾವಲಂಬಿಗಳನ್ನು ಒಂದು ಗಂಟೆಯೊಳಗೆ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು DMEM ನೊಂದಿಗೆ ಪುನಃ ತುಂಬಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.BV2 ಕೋಶಗಳಿಂದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್ ಮೂಲಕ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ.ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಥವಾ ಪ್ರೊಟೀನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ 300 µl PBS ನಲ್ಲಿ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್ ಪೆಲೆಟ್ ಅನ್ನು ಮರುಹೊಂದಿಸಿ.ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು BCA ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅಸ್ಸೇ ಕಿಟ್ (ಪಿಯರ್ಸ್, ರಾಕ್‌ಫೋರ್ಡ್, IL, USA) ಮತ್ತು ನ್ಯಾನೊಡ್ರಾಪ್ 2000 ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಬಳಸಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.
BV2 ಕೋಶಗಳಿಂದ ಅಥವಾ BV2 ನಿಂದ ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು PRO-PREP™ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ (iNtRon ಬಯೋಟೆಕ್ನಾಲಜಿ, ಸಿಯೋಂಗ್ನಮ್, ಕೊರಿಯಾ) ಲೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಕೂಮಾಸ್ಸಿ ಅದ್ಭುತ ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದ 10% SDS ಪಾಲಿಯಾಕ್ರಿಲಮೈಡ್ ಜೆಲ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಲೋಡ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ PVDF ಮೆಂಬರೇನ್ಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು.ಅಲಿಕ್ಸ್ ಪ್ರತಿಕಾಯವನ್ನು (ಸೆಲ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜಿ, ಬೆವರ್ಲಿ, MA, USA) ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ ಮಾರ್ಕರ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್‌ಗಳನ್ನು ಮೌಲ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.HRP-ಸಂಯೋಜಿತ ಮೇಕೆ ವಿರೋಧಿ ಮೌಸ್ IgG (H + L) (ಬೆಥೈಲ್ ಲ್ಯಾಬೊರೇಟರೀಸ್, ಮಾಂಟ್ಗೊಮೆರಿ, TX, USA) ಮತ್ತು LAS-1000 ಪ್ಲಸ್ ಲ್ಯುಮಿನೆಸೆಂಟ್ ಇಮೇಜ್ ವಿಶ್ಲೇಷಕವನ್ನು (ಫುಜಿ ಫೋಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಫಿಲ್ಮ್, ಟೋಕಿಯೊ, ಜಪಾನ್) ದ್ವಿತೀಯ ಪ್ರತಿಕಾಯವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ..ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮಿಷನ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.BV2 ಕೋಶಗಳಿಂದ (6.40 µg/µl) ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಕಾರ್ಬನ್-ಲೇಪಿತ ಜಾಲರಿಗಳ ಮೇಲೆ ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 1 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 2% ಯುರೇನಿಲ್ ಅಸಿಟೇಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ.ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ES1000W ಎರ್ಲಾಂಗ್‌ಶೆನ್ CCD ಕ್ಯಾಮೆರಾ (ಗಟಾನ್, ಪ್ಲೆಸೆಂಟನ್, CA, USA) ಹೊಂದಿರುವ JEOL 1200-EX II (ಟೋಕಿಯೊ, ಜಪಾನ್) ಬಳಸಿಕೊಂಡು 80 kV ವೇಗವರ್ಧಕ ವೋಲ್ಟೇಜ್‌ನಲ್ಲಿ ವೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ.
BV2-ಪಡೆದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು PKH26 ರೆಡ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಲಿಂಕರ್ ಕಿಟ್ (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, ಸೇಂಟ್ ಲೂಯಿಸ್, MO, USA) ಬಳಸಿ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ.U87 ಜೀವಕೋಶಗಳು, 2×105, PKH26-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಿದ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ (ಕೆಂಪು) ಅಥವಾ ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಯಾವುದೇ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳಿಲ್ಲ, 5% CO2 ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.U87 ಜೀವಕೋಶದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು DAPI (ನೀಲಿ) ಯೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ, U87 ಕೋಶಗಳನ್ನು 4% ಪ್ಯಾರಾಫಾರ್ಮಾಲ್ಡಿಹೈಡ್‌ನಲ್ಲಿ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಲೈಕಾ TCS SP8 STED CW ಕಾನ್ಫೋಕಲ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ನಲ್ಲಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ (ಲೈಕಾ ಮೈಕ್ರೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್, ಮ್ಯಾನ್‌ಹೈಮ್, ಜರ್ಮನಿ).ಗಮನಿಸಬಹುದಾದ.
ಮಿರ್-ಎಕ್ಸ್ ಸಿಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಫಸ್ಟ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಸಿಂಥೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಎಸ್‌ವೈಬಿಆರ್ ಕ್ಯೂಆರ್‌ಟಿ-ಪಿಸಿಆರ್ ಕಿಟ್ (ಟಕಾರ ಬಯೋ ಇಂಕ್., ಶಿಗಾ, ಜಪಾನ್) ಬಳಸಿ ಸಿಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯಿಂದ ಸಿಡಿಎನ್‌ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು.SYBR ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಸಿದ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು iQ5 ನೈಜ-ಸಮಯದ PCR ಪತ್ತೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು (ಬಯೋ-ರಾಡ್, ಹರ್ಕ್ಯುಲಸ್, CA, USA) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನೈಜ ಸಮಯದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿದೆ.ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು 15 ಸೆಕೆಂಡ್‌ಗೆ 95 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಡಿನಾಟರೇಶನ್‌ನ 40 ಚಕ್ರಗಳಿಗೆ ವರ್ಧಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 60 ಸೆಕೆಂಡ್‌ಗೆ 60 ಡಿಗ್ರಿ ಸಿ ನಲ್ಲಿ ಅನೆಲಿಂಗ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರತಿ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಡೇಟಾವನ್ನು iQ™5 ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (ಬಯೋ-ರಾಡ್) ನ ಡೇಟಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮಾಡ್ಯೂಲ್ ಬಳಸಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ಆಯ್ದ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು β-ಆಕ್ಟಿನ್/siRNA (ಮತ್ತು U6) ನಡುವಿನ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯಲ್ಲಿನ ಸಾಪೇಕ್ಷ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಕರ್ವ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ.ಬಳಸಿದ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 1 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.
3 x 104 U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳನ್ನು 96-ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬಿತ್ತಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು BV2 (50 μg/mL) ನಿಂದ ಪಡೆದ ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ-ಸೋಂಕಿತ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ BV2 (50 μg/mL) ನಿಂದ ಪಡೆದ ನಾನ್‌ಪಲ್ಸ್ ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು 12, 18 ಮತ್ತು 136 ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. .ಸೆಲ್ ಪ್ರಸರಣ ದರವನ್ನು ಸೆಲ್ ಕೌಂಟಿಂಗ್ ಕಿಟ್-8 (ಡೊಜಿಂಡೋ, ಕುಮಾಮೊಟೊ, ಜಪಾನ್) ಬಳಸಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಪೂರಕ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳು S1-S3) 46 .
5-ವಾರದ ಹೆಣ್ಣು BALB/c ನಗ್ನ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಓರಿಯಂಟ್ ಬಯೋ (ಸಿಯೊಂಗ್ನಮ್-ಸಿ, ದಕ್ಷಿಣ ಕೊರಿಯಾ) ನಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (22± 2 ° C) ಮತ್ತು ಆರ್ದ್ರತೆ (45± 15 ° C) ನಲ್ಲಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಬರಡಾದ ಪಂಜರಗಳಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು.%) ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (22 ± 2 ° C) ಮತ್ತು ಆರ್ದ್ರತೆ (45 ± 15%).SPF (ಸಿಯೋಲ್ ನ್ಯಾಷನಲ್ ಯೂನಿವರ್ಸಿಟಿ ಸ್ಕೂಲ್ ಆಫ್ ಮೆಡಿಸಿನ್ ಅನಿಮಲ್ ಸೆಂಟರ್) ಅಡಿಯಲ್ಲಿ 12-ಗಂಟೆಗಳ ಬೆಳಕಿನ ಚಕ್ರ ಮತ್ತು 12-ಗಂಟೆಗಳ ಡಾರ್ಕ್ ಸೈಕಲ್ ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಇಲಿಗಳನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿ 5 ಇಲಿಗಳ ಮೂರು ಗುಂಪುಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಎಲ್ಲಾ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು 1 x 107 U87 ಗ್ಲಿಯೋಮಾ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 400 ml PBS ನೊಂದಿಗೆ ಸಬ್ಕ್ಯುಟೇನಿಯಸ್ ಆಗಿ ಚುಚ್ಚಲಾಯಿತು ಮತ್ತು BD ಮ್ಯಾಟ್ರಿಜೆಲ್ ™ (BD ಸೈನ್ಸ್, ಮಿಯಾಮಿ, FL, USA) ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಅಂಶವನ್ನು ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.ಗೆಡ್ಡೆಯ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನ ಆರು ದಿನಗಳ ನಂತರ, BV2 ಕೋಶಗಳಿಂದ ಪಡೆದ 200 mg ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್‌ಗಳನ್ನು (ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಸೋಂಕಿನೊಂದಿಗೆ / ಇಲ್ಲದೆ) ಗೆಡ್ಡೆಯ ಸೈಟ್‌ಗೆ ಚುಚ್ಚಲಾಗುತ್ತದೆ.ಗೆಡ್ಡೆಯ ಸೋಂಕಿನ ಇಪ್ಪತ್ತೆರಡು ದಿನಗಳ ನಂತರ, ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿರುವ ಇಲಿಗಳ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಗಾತ್ರವನ್ನು ವಾರಕ್ಕೆ ಮೂರು ಬಾರಿ ಕ್ಯಾಲಿಪರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸೂತ್ರದಿಂದ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ: 0.5×(ಅಗಲ)×2×ಉದ್ದ.
miRCURYTM LNA miRNA ರಚನೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೈಕ್ರೋಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, 7 ನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ಎಂಎಂಯು ಮತ್ತು ಆರ್‌ನೋ ಅರೇಗಳು (ಎಕ್ಸಿಕಾನ್, ವೆಡ್‌ಬೆಕ್, ಡೆನ್ಮಾರ್ಕ್) 3100 ಮಾನವ, ಇಲಿ ಮತ್ತು ಇಲಿ ಮೈಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕ್ಯಾಪ್ಚರ್ ಪ್ರೋಬ್‌ಗಳಲ್ಲಿ 1119 ಉತ್ತಮ-ಗುಣಮಟ್ಟದ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ಈ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, 250 ರಿಂದ 1000 ng ಒಟ್ಟು RNA ಯನ್ನು 5′-ಫಾಸ್ಫೇಟ್‌ನಿಂದ ಕರು ಕರುಳಿನ ಕ್ಷಾರೀಯ ಫಾಸ್ಫೇಟೇಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡುವ ಮೂಲಕ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ Hy3 ಹಸಿರು ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಡೈನೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಂತರ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಹೈಬ್ರಿಡೈಸೇಶನ್ ಚೇಂಬರ್ ಕಿಟ್ (ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್, ಸಾಂಟಾ ಕ್ಲಾರಾ, CA, USA) ಮತ್ತು ಹೈಬ್ರಿಡೈಸೇಶನ್ ಸ್ಲೈಡ್ ಕಿಟ್ (ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್) ಬಳಸಿ ಮೈಕ್ರೋಅರೇ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಲೋಡ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಹೈಬ್ರಿಡೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಹೈಬ್ರಿಡೈಸೇಶನ್ ಅನ್ನು 16 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 56 ° C ನಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು, ನಂತರ ತಯಾರಕರ ಶಿಫಾರಸುಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಮೈಕ್ರೋಅರೇಗಳನ್ನು ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮೈಕ್ರೋಅರೇ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ನಂತರ ಎಜಿಲೆಂಟ್ G2565CA ಮೈಕ್ರೋಅರೇ ಸ್ಕ್ಯಾನರ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ (ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್) ಬಳಸಿ ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು.ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಫೀಚರ್ ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಕ್ಷನ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಆವೃತ್ತಿ 10.7.3.1 (ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡಲಾದ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಆಮದು ಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಚಿತ್ರದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಎಕ್ಸಿಕಾನ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ನ ಅನುಗುಣವಾದ GAL ಫೈಲ್ ಬಳಸಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕಾಗಿ ಮೈಕ್ರೋಅರೇ ಡೇಟಾವನ್ನು GEO ಡೇಟಾಬೇಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ರವೇಶ ಸಂಖ್ಯೆ GPL32397 ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಠೇವಣಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾದಿಂದ ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾದ RH ಅಥವಾ ME49 ತಳಿಗಳ ಮೈಕ್ರೊಗ್ಲಿಯಾದಲ್ಲಿನ ಪ್ರೌಢ ಎಕ್ಸೋಸೋಮಲ್ ಮೈಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ಗಳನ್ನು ವಿವಿಧ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ ಉಪಕರಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ miRNAಗಳನ್ನು miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ಬಳಸಿ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 8.0 ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಿದ ಸಿಗ್ನಲ್ ತೀವ್ರತೆ (log2) ನೊಂದಿಗೆ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.miRNA ಗಳಲ್ಲಿ, ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾದ miRNA ಗಳು T. ಗೊಂಡಿಯಿಂದ ಸೋಂಕಿತ RH ಅಥವಾ ME49 ತಳಿಗಳಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸಲ್ಪಟ್ಟ miRNA ಗಳ ಫಿಲ್ಟರ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ 1.5- ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚು ಬದಲಾಗಿರುವುದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ.
ಲಿಪೊಫೆಕ್ಟಮೈನ್ 2000 (ಇನ್ವಿಟ್ರೋಜನ್, ಕಾರ್ಲ್ಸ್‌ಬಾಡ್, CA, USA) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಆಪ್ಟಿ-MEM (ಗಿಬ್ಕೊ, ಕಾರ್ಲ್ಸ್‌ಬಾಡ್, CA, USA) ನಲ್ಲಿ ಆರು-ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ (3 x 105 ಕೋಶಗಳು/ಬಾವಿ) ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಬಿತ್ತಲಾಗಿದೆ.ವರ್ಗಾವಣೆಗೊಂಡ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು 6 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತಾಜಾ ಸಂಪೂರ್ಣ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು.ವರ್ಗಾವಣೆಯಾದ 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಎಕ್ಸೆಲ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್‌ನೊಂದಿಗೆ (ಮೈಕ್ರೋಸಾಫ್ಟ್, ವಾಷಿಂಗ್ಟನ್, ಡಿಸಿ, ಯುಎಸ್‌ಎ) ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರಾಣಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ಪ್ರಿಸ್ಮ್ 3.0 ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (ಗ್ರಾಫ್‌ಪ್ಯಾಡ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್, ಲಾ ಜೊಲ್ಲಾ, ಸಿಎ, ಯುಎಸ್‌ಎ) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಎರಡು-ಮಾರ್ಗದ ANOVA ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. P-ಮೌಲ್ಯಗಳು <0.05 ಅನ್ನು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿದೆ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. ಪಿ-ಮೌಲ್ಯಗಳು <0.05 ಅನ್ನು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿದೆ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P ಮೌಲ್ಯಗಳು <0.05 ಅನ್ನು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿದೆ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义。 P 值< 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P ಮೌಲ್ಯಗಳು <0.05 ಅನ್ನು ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಾಗಿ ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿದೆ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗಳನ್ನು ಸಿಯೋಲ್ ನ್ಯಾಷನಲ್ ಯೂನಿವರ್ಸಿಟಿ ಸ್ಕೂಲ್ ಆಫ್ ಮೆಡಿಸಿನ್‌ನ ಸಾಂಸ್ಥಿಕ ವಿಮರ್ಶೆ ಮಂಡಳಿಯು ಅನುಮೋದಿಸಿದೆ (IRB ಸಂಖ್ಯೆ SNU-150715-2).
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
ಫರ್ಲಿ, ಜೆ. ಮತ್ತು ಇತರರು.2018 ರಲ್ಲಿ ಅಂದಾಜು ಜಾಗತಿಕ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಸಂಭವ ಮತ್ತು ಮರಣ: GLOBOCAN ಮೂಲಗಳು ಮತ್ತು ವಿಧಾನಗಳು.ವ್ಯಾಖ್ಯಾನ.ಜೆ. ರಕ್ 144, 1941–1953 (2019).
ರಶೀದ್, ಎಸ್., ರೆಹಮಾನ್, ಕೆ. & ಆಕಾಶ್, MS ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಗಳ ಅಪಾಯಕಾರಿ ಅಂಶಗಳ ಒಳನೋಟ. ರಶೀದ್, ಎಸ್., ರೆಹಮಾನ್, ಕೆ. & ಆಕಾಶ್, MS ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಗಳ ಅಪಾಯಕಾರಿ ಅಂಶಗಳ ಒಳನೋಟ.ರಶೀದ್, ಎಸ್., ರೆಹಮಾನ್, ಕೆ. ಮತ್ತು ಆಕಾಶ್, ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಮುಖ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಗಳಿಗೆ ಅಪಾಯಕಾರಿ ಅಂಶಗಳ ವಿಮರ್ಶೆ. ರಶೀದ್, ಎಸ್., ರೆಹಮಾನ್, ಕೆ. & ಆಕಾಶ್, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 ರಶೀದ್, ಎಸ್., ರೆಹಮಾನ್, ಕೆ. & ಆಕಾಶ್, MS ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಅಪಾಯದ ಅಂಶಗಳು ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಗಳ ಆಳವಾದ ತಿಳುವಳಿಕೆ.ರಶೀದ್, ಎಸ್., ರೆಹಮಾನ್, ಕೆ. ಮತ್ತು ಆಕಾಶ್, ಮೆದುಳಿನ ಗೆಡ್ಡೆಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಮುಖ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಗಳಿಗೆ ಅಪಾಯಕಾರಿ ಅಂಶಗಳ ವಿಮರ್ಶೆ.ಬಯೋಮೆಡಿಕಲ್ ವಿಜ್ಞಾನ.ಫಾರ್ಮಾಸಿಸ್ಟ್.143, 112119 (2021).
ಕ್ಯಾಟೊ, ಐ., ಝಾಂಗ್, ಜೆ. & ಸನ್, ಜೆ. ಮಾನವನ ಓರೊಡೈಜೆಸ್ಟಿವ್ ಮತ್ತು ಸ್ತ್ರೀ ಜನನಾಂಗದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ-ವೈರಲ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು: ಎಪಿಡೆಮಿಯೋಲಾಜಿಕ್ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಪುರಾವೆಗಳ ಸಾರಾಂಶ. ಕ್ಯಾಟೊ, ಐ., ಝಾಂಗ್, ಜೆ. & ಸನ್, ಜೆ. ಮಾನವನ ಓರೊಡೈಜೆಸ್ಟಿವ್ ಮತ್ತು ಸ್ತ್ರೀ ಜನನಾಂಗದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ-ವೈರಲ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು: ಎಪಿಡೆಮಿಯೋಲಾಜಿಕ್ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಪುರಾವೆಗಳ ಸಾರಾಂಶ.ಕ್ಯಾಟೊ I., ಜಾಂಗ್ ಜೆ. ಮತ್ತು ಸನ್ ಜೆ. ಮಾನವನ ಜೀರ್ಣಾಂಗವ್ಯೂಹದ ಮತ್ತು ಸ್ತ್ರೀ ಜನನಾಂಗದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ-ವೈರಲ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು: ಎಪಿಡೆಮಿಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಡೇಟಾದ ಸಾರಾಂಶ. ಕ್ಯಾಟೊ, ಐ., ಝಾಂಗ್, ಜೆ. & ಸನ್, ಜೆ.证据总结. ಕ್ಯಾಟೊ, I., ಜಾಂಗ್, J. & ಸನ್, J. ಮಾನವನ ಬಾಯಿಯ ಕುಹರದ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಸ್ತ್ರೀ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ-ವೈರಲ್ ಸಂವಹನ: ಜನಪ್ರಿಯ ರೋಗ ವಿಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಪುರಾವೆಗಳ ಸಾರಾಂಶ.ಕ್ಯಾಟೊ I., ಝಾಂಗ್ J. ಮತ್ತು ಸನ್ J. ಮಾನವ ಜಠರಗರುಳಿನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಮತ್ತು ಸ್ತ್ರೀ ಜನನಾಂಗದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನಲ್ಲಿ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ-ವೈರಲ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು: ಎಪಿಡೆಮಿಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಡೇಟಾದ ಸಾರಾಂಶ.ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ 14, 425 (2022).
ಮ್ಯಾಗೊನ್, ಕೆಎಲ್ & ಪ್ಯಾರಿಷ್, ಜೆಎಲ್ ಸೋಂಕಿನಿಂದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗೆ: ಡಿಎನ್‌ಎ ಟ್ಯೂಮರ್ ವೈರಸ್‌ಗಳು ಹೋಸ್ಟ್ ಸೆಲ್ ಸೆಂಟ್ರಲ್ ಕಾರ್ಬನ್ ಮತ್ತು ಲಿಪಿಡ್ ಮೆಟಾಬಾಲಿಸಮ್ ಅನ್ನು ಹೇಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತವೆ. ಮ್ಯಾಗೊನ್, ಕೆಎಲ್ & ಪ್ಯಾರಿಷ್, ಜೆಎಲ್ ಸೋಂಕಿನಿಂದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗೆ: ಡಿಎನ್‌ಎ ಟ್ಯೂಮರ್ ವೈರಸ್‌ಗಳು ಹೋಸ್ಟ್ ಸೆಲ್ ಸೆಂಟ್ರಲ್ ಕಾರ್ಬನ್ ಮತ್ತು ಲಿಪಿಡ್ ಮೆಟಾಬಾಲಿಸಮ್ ಅನ್ನು ಹೇಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತವೆ.ಮಹೋನ್, ಕೆಎಲ್ ಮತ್ತು ಪ್ಯಾರಿಶ್, ಜೆಎಲ್ ಫೈರ್ ಇನ್ಫೆಕ್ಷನ್ ಟು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್: ಡಿಎನ್‌ಎ ಆಧಾರಿತ ಟ್ಯೂಮರ್ ವೈರಸ್‌ಗಳು ಹೋಸ್ಟ್ ಸೆಲ್ ಸೆಂಟ್ರಲ್ ಕಾರ್ಬನ್ ಮತ್ತು ಲಿಪಿಡ್ ಮೆಟಾಬಾಲಿಸಮ್ ಅನ್ನು ಹೇಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತವೆ. ಮಾಗೊನ್, KL & ಪ್ಯಾರಿಷ್, JL ಮ್ಯಾಗೊನ್, ಕೆಎಲ್ ಮತ್ತು ಪ್ಯಾರಿಷ್, ಜೆಎಲ್ ಸೋಂಕಿನಿಂದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗೆ: ಡಿಎನ್‌ಎ ಟ್ಯೂಮರ್ ವೈರಸ್‌ಗಳು ಹೋಸ್ಟ್ ಸೆಲ್ ಸೆಂಟ್ರಲ್ ಕಾರ್ಬನ್ ಮತ್ತು ಲಿಪಿಡ್ ಮೆಟಾಬಾಲಿಸಮ್ ಅನ್ನು ಹೇಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತವೆ.ಮಹೋನ್, ಕೆಎಲ್ ಮತ್ತು ಪ್ಯಾರಿಶ್, ಜೆಎಲ್ ಫೈರ್ಸ್ ಇನ್ಫೆಕ್ಷನ್ ಟು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್: ಡಿಎನ್‌ಎ ಟ್ಯೂಮರ್ ವೈರಸ್‌ಗಳು ಆತಿಥೇಯ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರ ಕಾರ್ಬನ್ ಮತ್ತು ಲಿಪಿಡ್ ಮೆಟಾಬಾಲಿಸಮ್ ಅನ್ನು ಹೇಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತವೆ.ತೆರೆದ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ.11, 210004 (2021).
ಕೊರಿಯಾ ಡ ಕೋಸ್ಟಾ, JM ಮತ್ತು ಇತರರು.ಸ್ಕಿಸ್ಟೋಸೋಮ್‌ಗಳ ಕ್ಯಾಟೆಕೋಲ್ ಈಸ್ಟ್ರೋಜೆನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಯಕೃತ್ತು ಫ್ಲೂಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಹೆಲ್ಮಿಂತ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್.ಮುಂಭಾಗ.ಒಳಗೆ ಬಿಸಿ.5, 444 (2014).