ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಒಂದು ಪರಾವಲಂಬಿ ಜೀವಿಯಾಗಿದ್ದು ಅದು ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಅತಿಸಾರದ ವೈದ್ಯಕೀಯ ಚಿಹ್ನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಚಿಕ್ಕ ಮಕ್ಕಳಲ್ಲಿ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾದ ಕರುಳಿನ ಸೋಂಕು.ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಜಿ. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್ ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ ಆಲಿಗೋಮೆರೈಸೇಶನ್ ತರಹದ ಗ್ರಾಹಕ 3 (NLRP3) ಬೈಂಡಿಂಗ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ಗಳ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ವೆಸಿಕಲ್ (EV) ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯ ಮೂಲಕ ಹೋಸ್ಟ್ ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಹಿಂದೆ ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ರೋಗಕಾರಕ-ಸಂಬಂಧಿತ ಡ್ಯುವೋಡೆನೊಕೊಕಲ್ EV (GEV) ಯ ನಿಖರವಾದ ಆಣ್ವಿಕ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ.
ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಯುಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳು pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು GEV ಯಲ್ಲಿ ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಲಾಯಿತು, ಮೌಸ್ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತದ ಗುರಿಯ ಅಣು ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಅನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಯಿತು.p20 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಯಿತು..G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯರ್ಡೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಮೂಲತಃ NLRP3 ಉರಿಯೂತ (NLRP3, ಪ್ರೊ-ಇಂಟರ್‌ಲ್ಯೂಕಿನ್-1 ಬೀಟಾ [IL-1β], ಪ್ರೊ-ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 p20), IL ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ.1β ಮಟ್ಟಗಳು, ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಸ್ಪಾಟೆಡ್ ಪ್ರೊಟೀನ್ (ASC) ಆಲಿಗೊಮೆರೈಸೇಶನ್ ಮಟ್ಟಗಳು ಮತ್ತು NLRP3 ಮತ್ತು ASC ಯ ಇಮ್ಯುನೊಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಸ್ಥಳೀಕರಣ.G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್‌ನ ರೋಗಕಾರಕತೆಯಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಪಾತ್ರವನ್ನು ನಂತರ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಇದರಲ್ಲಿ NLRP3 ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸಲಾಗಿದೆ (NLRP3 ನಿರ್ಬಂಧಿಸಲಾಗಿದೆ ಇಲಿಗಳು) ಮತ್ತು ದೇಹದ ತೂಕ, ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಪರಾವಲಂಬಿ ಹೊರೆ ಮತ್ತು ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿನ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು.ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಹೈಯರ್ಡಿನ್‌ಗಳು ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ 3 ಉರಿಯೂತದ ಮೂಲಕ ವಿವೊದಲ್ಲಿ ಐಎಲ್-1β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆಯೇ ಎಂದು ನಾವು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ ಜಿ. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್‌ನ ರೋಗಕಾರಕತೆಯಲ್ಲಿ ಈ ಅಣುಗಳ ಪಾತ್ರವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿದ್ದೇವೆ.
ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ಗಳು ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ3 ಇನ್‌ಫ್ಲಾಮಸಮ್ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ.ಇದು p20 ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು ಕಾರಣವಾಯಿತು, NLRP3, ಪ್ರೊ-IL-1β, ಮತ್ತು ಪ್ರೊ-ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಳ, IL-1β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಹೆಚ್ಚಳ, ASA ಕಲೆಗಳ ರಚನೆ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂ, ಮತ್ತು ಎಎಸ್ಎ ಆಲಿಗೊಮೆರೈಸೇಶನ್‌ನ ಇಂಡಕ್ಷನ್.NLRP3 ಉರಿಯೂತ ಶಿಶ್ನ ನಷ್ಟವು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ನ ರೋಗಕಾರಕತೆಯನ್ನು ಉಲ್ಬಣಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ3-ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಇಲಿಗಳಿಂದ ಗ್ಯಾವೇಜ್‌ನಿಂದ ಸಿಸ್ಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದ ಇಲಿಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದವು ಮತ್ತು ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ವಿಲ್ಲಿಗೆ ತೀವ್ರವಾದ ಹಾನಿಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಕುಗ್ಗಿದ ಮತ್ತು ಕವಲೊಡೆಯುವ ನೆಕ್ರೋಟಿಕ್ ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳಿಂದ ನಿರೂಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ.ವಿವೋ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ಗಳು ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ 3 ಉರಿಯೂತದ ಮೂಲಕ IL-1β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳು ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣೆಯು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ ಜಿ. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್‌ನ ರೋಗಕಾರಕತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ.
ಒಟ್ಟಾಗಿ ತೆಗೆದುಕೊಂಡರೆ, ಈ ಅಧ್ಯಯನದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಆತಿಥೇಯ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟುವ ಭರವಸೆಯ ಗುರಿಗಳಾಗಿರುವ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ನ ಸೋಂಕನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಡ್ಯುಯೊಡಿನಮ್ ಒಂದು ಬಾಹ್ಯಕೋಶದ ಪ್ರೊಟೊಜೋವನ್ ಪರಾವಲಂಬಿಯಾಗಿದ್ದು ಅದು ಸಣ್ಣ ಕರುಳಿನಲ್ಲಿ ವಾಸಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಾರ್ಷಿಕವಾಗಿ ಅತಿಸಾರದೊಂದಿಗೆ 280 ಮಿಲಿಯನ್ ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್ ಪ್ರಕರಣಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಶೀಲ ರಾಷ್ಟ್ರಗಳಲ್ಲಿ ಚಿಕ್ಕ ಮಕ್ಕಳಲ್ಲಿ [1].ಜನರು ಕುಡಿಯುವ ನೀರು ಅಥವಾ M. ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಸಿಸ್ಟ್‌ಗಳಿಂದ ಕಲುಷಿತಗೊಂಡ ಆಹಾರದಿಂದ ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತಾರೆ, ನಂತರ ಅದು ಹೊಟ್ಟೆಯನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಗ್ಯಾಸ್ಟ್ರಿಕ್ ರಸದಲ್ಲಿ ಹೊರಹಾಕಲ್ಪಡುತ್ತದೆ.ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳು ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಎಪಿಥೀಲಿಯಂಗೆ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ, ಇದು ವಾಕರಿಕೆ, ವಾಂತಿ, ಅತಿಸಾರ, ಹೊಟ್ಟೆ ನೋವು ಮತ್ತು ತೂಕ ನಷ್ಟಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಇಮ್ಯುನೊ ಡಿಫಿಷಿಯನ್ಸಿ ಮತ್ತು ಸಿಸ್ಟಿಕ್ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಹೊಂದಿರುವ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳು ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತಾರೆ.ಮೌಖಿಕ ಮತ್ತು ಗುದ ಸಂಭೋಗದ ಮೂಲಕವೂ ಸೋಂಕು ಸಂಭವಿಸಬಹುದು [2].ಮೆಟ್ರೋನಿಡಜೋಲ್, ಟಿನಿಡಾಜೋಲ್ ಮತ್ತು ನಿಟಾಜೋಕ್ಸನೈಡ್ ನಂತಹ ಔಷಧಿಗಳು ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಸೋಂಕುಗಳಿಗೆ ಆದ್ಯತೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಆಯ್ಕೆಗಳಾಗಿವೆ [3].ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಕಿಮೊಥೆರಪಿ ಔಷಧಿಗಳು ವಾಕರಿಕೆ, ಕಾರ್ಸಿನೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಜಿನೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿ [4] ನಂತಹ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಅಡ್ಡ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತವೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ.
ಉರಿಯೂತಗಳು ಸೈಟೊಸೊಲಿಕ್ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳ ಒಂದು ವರ್ಗವಾಗಿದ್ದು ಅದು ಸಹಜ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಭಾಗವಾಗಿದೆ, ರೋಗಕಾರಕ ಆಕ್ರಮಣದಿಂದ ರಕ್ಷಿಸಲು ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ [5].ಈ ಉರಿಯೂತಗಳಲ್ಲಿ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಆಲಿಗೊಮೆರೈಸೇಶನ್ (NOD) ರಿಸೆಪ್ಟರ್ 3 (NLRP3) ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಆಲಿಗೋಮೆರೈಸೇಶನ್ (NLRP3) ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ತರಹದ ಉರಿಯೂತವನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಇದನ್ನು ವಿವಿಧ ರೋಗಕಾರಕ/ಹಾನಿ/ಸಂಬಂಧಿತ ಮೋಲ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು. DAMP), ಸಹಜ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ, ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ಮತ್ತು ಅನೇಕ ಉರಿಯೂತದ ಕಾಯಿಲೆಗಳಲ್ಲಿ [6,7,8] ಕರುಳಿನ ಹೋಮಿಯೋಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ.ಇದು ಪ್ಯಾಟರ್ನ್ ರೆಕಗ್ನಿಷನ್ ರಿಸೆಪ್ಟರ್ (PRR) NLRP3, ಅಡಾಪ್ಟರ್ ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಸ್ಪಾಟೆಡ್ ಪ್ರೊಟೀನ್ (ASC) ಮತ್ತು ಎಫೆಕ್ಟರ್ ಪ್ರೊಕಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಅಥವಾ ಪ್ರೊಕಾಸ್ಪೇಸ್-11 ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.NLRP3 ಉರಿಯೂತವು ರೋಗಕಾರಕ ಆಕ್ರಮಣದ ವಿರುದ್ಧ ಹೋಸ್ಟ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ನಿಯೋಸ್ಪೊರಾ ಕ್ಯಾನಿನಮ್ [9], ಪ್ಯಾರಾಕೊಕ್ಸಿಡಿಯೋಡ್ಸ್ ಬ್ರೆಸಿಲಿಯೆನ್ಸಿಸ್ [10] ಮತ್ತು ಲೀಶ್ಮೇನಿಯಾ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಿದಂತೆ.[11], ಆದರೆ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ರೋಗದ ಪ್ರಗತಿಯನ್ನು ಉಲ್ಬಣಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಹುಳುಗಳಲ್ಲಿ [12].ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಸಂಶೋಧನೆಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಸೆಲ್ಯುಲರ್ ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ 3 ಉರಿಯೂತದ ಜೀವಕೋಶದೊಳಗಿನ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಸೆಲ್ಯುಲರ್ ವೆಸಿಕಲ್ಸ್ (ಇವಿಗಳು) [13] ಸ್ರವಿಸುವ ಮೂಲಕ ಹೋಸ್ಟ್ ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕಿನಲ್ಲಿ ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ 3 ಉರಿಯೂತದ ಪಾತ್ರವು ವಿವೊದಲ್ಲಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಉಳಿದಿದೆ.
ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳನ್ನು ಮೂಲತಃ G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್‌ನ ರಚನಾತ್ಮಕ ಅಂಶಗಳೆಂದು ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸಣ್ಣ ಕರುಳಿನಲ್ಲಿ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್ ಚಲನಶೀಲತೆ ಮತ್ತು ಎಪಿತೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶದ ಜೋಡಣೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ.ಪರಿಸರಕ್ಕೆ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳಲು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ರೋಗಕಾರಕತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು, G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳು 8 ಫ್ಲ್ಯಾಜೆಲ್ಲಾ, 1 ಮಧ್ಯದ ದೇಹ ಮತ್ತು 1 ವೆಂಟ್ರಲ್ ಡಿಸ್ಕ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ರಚನೆಯನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದವು [14].ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್‌ನ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳು ತಮ್ಮ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಅನ್ನು ಮೇಲ್ಭಾಗದ ಸಣ್ಣ ಕರುಳಿನಲ್ಲಿ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಅನ್ನು ಭೇದಿಸಲು ಮತ್ತು ಎಂಟ್ರೊಸೈಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಲಗತ್ತಿಸಲು ಬಳಸುತ್ತವೆ.ಅವರು ನಿರಂತರವಾಗಿ ವಲಸೆ ಹೋಗುತ್ತಾರೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಚಯಾಪಚಯವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಎಪಿತೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಲಗತ್ತಿಸುತ್ತಾರೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಅವರ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಮತ್ತು ವೈರಲೆನ್ಸ್ ನಡುವೆ ನಿಕಟ ಸಂಬಂಧವಿದೆ.ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಡ್ಯುಯೊಡಿನಮ್‌ಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ಗಳು ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ರಚನೆಯ ಘಟಕಗಳಾಗಿವೆ [15] ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ನಾಲ್ಕು ವರ್ಗಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ: α-, β-, γ-, ಮತ್ತು δ-ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ಗಳು.α-ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಕುಟುಂಬದ 21 ಸದಸ್ಯರಿದ್ದಾರೆ, ಇವೆಲ್ಲವೂ ಫಾಸ್ಫೋಲಿಪಿಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಂಧಿಸುವ ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ-ಅವಲಂಬಿತ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ [16].ಅವರು ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟನ್ ಅನ್ನು ಜೀವಕೋಶ ಪೊರೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸುತ್ತಾರೆ.G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್‌ನಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಅತಿಸಾರವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ವ್ಯಕ್ತಿಗಳಲ್ಲಿ, α-ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳು ಸೋಂಕಿನ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾಶೀಲವಾಗಿರುತ್ತವೆ [17].ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಆಲ್ಫಾ-1 ಆಧಾರಿತ ಹೆಟೆರೊಲಾಜಸ್ ಲಸಿಕೆಗಳು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್‌ನಿಂದ ರಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ ಮತ್ತು ಲಸಿಕೆ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಸಂಭಾವ್ಯ ಅಭ್ಯರ್ಥಿ ಪ್ರತಿಜನಕಗಳಾಗಿವೆ [18].ಆಲ್ಫಾ-8 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್, ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಮೆಂಬರೇನ್ ಮತ್ತು ಫ್ಲ್ಯಾಜೆಲ್ಲಾದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಳೀಕರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ, ಆದರೆ ವೆಂಟ್ರಲ್ ಡಿಸ್ಕ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಲ್ಲ, ಜಿ. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್ [19] ನಲ್ಲಿ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳ ಚಲನಶೀಲತೆ ಮತ್ತು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ದರವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ.ಆಲ್ಫಾ-14 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಫ್ಲ್ಯಾಜೆಲ್ಲಾದಲ್ಲಿನ ಮೈಕ್ರೊಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ರಚನೆಗಳಿಗೆ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ [20] ನ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.ಆಲ್ಫಾ-11 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಜೀವನ ಚಕ್ರದುದ್ದಕ್ಕೂ ಹೇರಳವಾಗಿ ಇರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-11 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ನ ಅತಿಯಾದ ಒತ್ತಡವು ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್‌ಗೆ ಹಾನಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ [21].ಆದಾಗ್ಯೂ, ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳ ವಿರುದ್ಧ ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆಯೇ ಎಂಬುದು ಅಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿದೆ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಯುಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳು pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ಗಳನ್ನು ಹೋಸ್ಟ್ NLRP3 ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು ಮೌಸ್ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು.ನಂತರ ಉರಿಯೂತದ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಯಿತು.G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್‌ನ ರೋಗಕಾರಕತೆಯಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸಹ ನಾವು ನಿರ್ಣಯಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7,3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ಗಳು ವಿವೊದಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆಯೇ ಎಂದು ಪರಿಶೀಲಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ರೋಗಕಾರಕತ್ವದಲ್ಲಿ ಗಿಯರ್ಡೈನ್‌ಗಳ ಈ ಎರಡು ಪಾತ್ರಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್.G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕಿನ ತಡೆಗಟ್ಟುವಿಕೆಗಾಗಿ ಭರವಸೆಯ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವುದು ನಮ್ಮ ಸಾಮಾನ್ಯ ಗುರಿಯಾಗಿದೆ.
ವೈಲ್ಡ್ ಟೈಪ್ (WT) C57BL/6 5-8 ವಾರಗಳ ವಯಸ್ಸಿನ ಹೆಣ್ಣು ಇಲಿಗಳನ್ನು ಲಿಯಾನಿಂಗ್ ಚಾಂಗ್‌ಶೆಂಗ್ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರಾಣಿ ಕೇಂದ್ರದಿಂದ (ಲಿಯಾನಿಂಗ್, ಚೀನಾ) ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ.ಇಲಿಗಳು ನೀರಿಗೆ ಉಚಿತ ಪ್ರವೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದವು, ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಆಹಾರವನ್ನು ಸ್ವೀಕರಿಸಿದವು ಮತ್ತು 12/12 ಗಂಟೆಗಳ ಬೆಳಕು/ಡಾರ್ಕ್ ಚಕ್ರದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗಿತ್ತು.ಸೋಂಕಿನ ಮೊದಲು, ಇಲಿಗಳು ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ (1 mg/mL), ವ್ಯಾಂಕೊಮೈಸಿನ್ (1 mg/mL), ಮತ್ತು ನಿಯೋಮೈಸಿನ್ (1.4 mg/mL) ಜೊತೆಗೆ ಕುಡಿಯುವ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಆ್ಯಂಟಿಬಯೋಟಿಕ್‌ಗಳನ್ನು ಆ್ಯಂಟಿಬಯಾಟಿಕ್‌ಗಳನ್ನು ಪಡೆದವು (ಎಲ್ಲವನ್ನೂ ಶಾಂಘೈ, ಚೀನಾ, ಕೃತಕ ಜೀವಿಗಳಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ) [22] ].].> 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ತಿನ್ನುವ ಮತ್ತು ಕುಡಿಯುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಂಡಿರುವ ಮತ್ತು ≥ 20% ದೇಹದ ತೂಕವನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಂಡಿರುವ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಗರ್ಭಕಂಠದ ಸ್ಥಳಾಂತರಿಸುವಿಕೆಯಿಂದ ಮಾನವೀಯವಾಗಿ ದಯಾಮರಣಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.
WB G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳು (ಅಮೆರಿಕನ್ ಟೈಪ್ ಕಲ್ಚರ್ ಕಲೆಕ್ಷನ್, ಮನಾಸ್ಸಾಸ್, USA) 12.5% ​​ಭ್ರೂಣದ ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್ (FBS; ಪ್ರತಿ ಹಸಿರು, ಝೆಜಿಯಾಂಗ್, ಚೀನಾ) ಮತ್ತು 0.1% ಗೋವಿನ ಪಿತ್ತರಸ (ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್, USA) ನೊಂದಿಗೆ ಪೂರಕವಾಗಿದೆ. )ಯುಎಸ್ಎ) ಮೈಕ್ರೋಏರೋಬಿಕ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ.ಸಂಗಮ ಟ್ರೋಫೊಜೊಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಮಂಜುಗಡ್ಡೆಯ ಮೇಲೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಮುಂದಿನ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಗಾಗಿ 1:4 ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ ರವಾನಿಸಲಾಯಿತು.
ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಡ್ಯುಯೊಡಿನಮ್ ಚೀಲಗಳನ್ನು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲಾಯಿತು [23], ಟ್ರೊಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಲಾಗರಿಥಮಿಕ್ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ 1 × 106 ಟ್ರೋಫೊಜೋಯಿಟ್‌ಗಳು/ಮಿಎಲ್‌ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಎನ್‌ಕ್ಯಾಪ್ಸುಲೇಶನ್ ಪ್ರೇರಕ ಮಾಧ್ಯಮ, pH 7.1 (ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ TYI-S-33) ನೊಂದಿಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪಿತ್ತರಸ ಸಾಂದ್ರತೆ 0.05% ಮಧ್ಯಮ).ಲಾಗರಿಥಮಿಕ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಹಂತದವರೆಗೆ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಆಮ್ಲಜನಕರಹಿತ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.48-96 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 48-96 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಅನ್ನು 37 ° C ನಲ್ಲಿ (pH 7.8; ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ TYI-S-33 ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು pH 7.8; ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ, ಈ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ರಚನೆಯ ಚೀಲಗಳನ್ನು ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.ಹೆಚ್ಚಿನ ಟ್ರೋಫೋಜೋಯಿಟ್‌ಗಳು ಚೀಲಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ನಂತರ, ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಉಳಿದ ಟ್ರೋಫೋಜೋಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡಲು ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಡಿಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಪುನಃ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಗ್ಯಾಸ್ಟ್ರಿಕ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಮೂಲಕ ನಂತರದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಚೀಲಗಳನ್ನು ಎಣಿಕೆ ಮತ್ತು 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಸೆಲ್ಯುಲರ್ ವೆಸಿಕಲ್‌ಗಳನ್ನು (GEVs) ಪುಷ್ಟೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ [13].ಲಾಗರಿಥಮಿಕ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಟ್ರೋಫೋಜೋಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಎಕ್ಸೋಸೋಮ್-ಡಿಪ್ಲೀಟೆಡ್ ಎಫ್‌ಬಿಎಸ್ (ಬಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಇಂಡಸ್ಟ್ರೀಸ್, ಬೀಟ್-ಹೇಮೆಕ್, ಇಸ್ರೇಲ್) ನೊಂದಿಗೆ 1 × 106 ಪರಾವಲಂಬಿಗಳು/mL ನೊಂದಿಗೆ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ TYI-S-33 ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಮರುಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.10 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 2000 ಗ್ರಾಂ, 45 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 10,000 ಗ್ರಾಂ ಮತ್ತು 60 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 100,000 ಗ್ರಾಂ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮೂಲಕ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್‌ನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ.ಅವಕ್ಷೇಪಗಳನ್ನು ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ಡ್ ಸಲೈನ್ (PBS) ನಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, BCA ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅಸ್ಸೇ ಕಿಟ್ (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್, ವಾಲ್ಥಮ್, MA, USA) ಬಳಸಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು -80 ° C. ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ನೇರವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಈ ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಮೌಸ್ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಗಿದೆ [24].ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಇಲಿಗಳಿಗೆ (6-8 ವಾರಗಳ ವಯಸ್ಸಿನ) 2.5 ಮಿಲಿ 2.98% ಡಿಫ್ಕೊ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಥಿಯೋಗ್ಲೈಕಾಲ್ ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ (BD, ಫ್ರಾಂಕ್ಲಿನ್ ಲೇಕ್ಸ್, NJ, USA) ಚುಚ್ಚುಮದ್ದು (ಇಂಟ್ರಾಪೆರಿಟೋನಿಯಲಿ [ip]) ಮತ್ತು 3-4 ಅಂಗುಳಗಳನ್ನು ನೀಡಲಾಯಿತು.ದಯಾಮರಣದ ನಂತರ ಇಲಿಗಳ ಕಿಬ್ಬೊಟ್ಟೆಯ ಕುಹರದಿಂದ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳ ಅಮಾನತು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 1000 ಗ್ರಾಂನಲ್ಲಿ 3 ಬಾರಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.ಸೆಲ್ ಶುದ್ಧತೆ >98% ಆಗುವವರೆಗೆ ಸಿಡಿ11b ಮಾರ್ಕರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಿದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಫ್ಲೋ ಸೈಟೋಮೆಟ್ರಿಯಿಂದ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಯಿತು, ನಂತರ 6-ವೆಲ್ ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಿಗೆ (4.5 x 106 ಜೀವಕೋಶಗಳು/ಬಾವಿ) ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 37 ° C ನಲ್ಲಿ 10% FBS (ಬಯೋಇಂಡಸ್ಟ್ರಿ) ನೊಂದಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮತ್ತು 5% CO2.
1 ml TRIzol ಕಾರಕದಲ್ಲಿ (Vazyme, Nanjing, China) 1 × 107 ಟ್ರೋಫೋಜೋಯಿಟ್‌ಗಳಿಂದ RNAಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಯಿತು, MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, China) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಒಟ್ಟು G. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್ RNA ಯಿಂದ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪೂರಕವಾದ DNA (cDNA) ತಯಾರಕರ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ MonScript RTIIII ಸೂಪರ್ ಮಿಕ್ಸ್ (ಮೊನಾಡ್) ಅನ್ನು ಬಳಸುವುದು.
ಗುರಿ G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಜೀನ್‌ಗಾಗಿ CDS ಅನುಕ್ರಮ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು NCBI GenBank ನಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರತಿ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ತಡೆರಹಿತ ಕ್ಲೋನಿಂಗ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲು ಪ್ರೈಮರ್ 5.0 ಬಳಸಿ.ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ (5′-3′) ಮೂರು ಭಾಗಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ: ರೇಖಾತ್ಮಕ ವೆಕ್ಟರ್ pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) ಜೊತೆಗೆ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಅನುಕ್ರಮ ಮತ್ತು ATG ಮತ್ತು GNN ಕೋಡಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿ (ಮೊದಲ ಬೇಸ್ G ಅಲ್ಲದಿದ್ದರೆ).ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಇದನ್ನು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಜೊತೆಗೆ, ಕನಿಷ್ಠ 16 ಬಿಪಿ ಸಂಯೋಜಿತ ಬೇಸ್‌ಗಳು (ಜಿಸಿ ವಿಷಯ 40-60%/Tm ಅಂದಾಜು. 55 °C).ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್ (5′-3′) ಎರಡು ಭಾಗಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, EcoRV-ರೇಖಾತ್ಮಕ ವೆಕ್ಟರ್ pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) ಮತ್ತು ಕನಿಷ್ಠ 16 ಬಿಪಿಯ ಸಂಯೋಜಿತ ಬೇಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುವ ಅನುಕ್ರಮ.(ಕೊನೆಯ ಎರಡು ನಿಲ್ದಾಣಗಳನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ).ಆಧಾರಗಳು) ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳು ತಮ್ಮ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡಲು AA ಅಥವಾ GA ಯಂತಹ ಕೋಡಾನ್).ಪ್ರೈಮರ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್‌ಗಳನ್ನು ಟೇಬಲ್ 1 ರಲ್ಲಿ ಪಟ್ಟಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕಾಂಗ್‌ಮೆಟ್ ಬಯೋಟೆಕ್ನಾಲಜಿ ಕಂ, ಲಿಮಿಟೆಡ್ (ಚಾಂಗ್‌ಚುನ್, ಚೀನಾ) ನಿಂದ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.
Pfu DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ (Tiangen, Beijing, China) ಅಥವಾ Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ G. duodenalis cDNA ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಗುರಿಗಳನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲಾಗಿದೆ.ಯುಕ್ಯಾರಿಯೋಟಿಕ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಶನ್ ವೆಕ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pcDNA3.1(+) ಅನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಕಿಣ್ವ EcoRV ನೊಂದಿಗೆ ರೇಖೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಫಾಸ್ಟ್ ಎಪಿ (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಡಿಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಲೀನಿಯರೈಸ್ಡ್ pcDNA3.1(+) ತುಣುಕುಗಳು ಮತ್ತು ವರ್ಧಿತ ಗುರಿ ಜೀನ್ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು DNA ಜೆಲ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಿಟ್ (ಟಿಯಾಂಗೆನ್) ಬಳಸಿ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನ್ಯಾನೊಡ್ರಾಪ್ ND-2000 (ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್) ಬಳಸಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಯಿತು.PCDNA3.1(+) ತುಣುಕು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಗುರಿಯ ಜೀನ್ ತುಣುಕನ್ನು MonClone ಸಿಂಗಲ್ ಅಸೆಂಬ್ಲಿ ಕ್ಲೋನಿಂಗ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು (ಮೊನಾಡ್ ಬಯೋಟೆಕ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್, ಸುಝೌ, ಚೀನಾ) ಬಳಸಿ ಮರುಸಂಯೋಜಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕೊಮೇಟ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್ ಕಂಪನಿ ಲಿಮಿಟೆಡ್ (ಚಾಂಗ್‌ಚುನ್, ಚೀನಾ) ಬಳಸಿಕೊಂಡು DNA ಅನುಕ್ರಮದಿಂದ ದೃಢೀಕರಿಸಲಾಯಿತು..
ಎಂಡೋಟಾಕ್ಸಿನ್-ಮುಕ್ತ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳು pcDNA3.1(+)-alpha-2 ಮತ್ತು pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ಅನ್ನು ಸ್ಯಾನ್‌ಪ್ರೆಪ್ ಎಂಡೋಟಾಕ್ಸಿನ್-ಮುಕ್ತ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಮಿನಿ ಕಿಟ್ (ಸಾಂಗೋನ್ ಬಯೋಟೆಕ್) ಬಳಸಿ ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಗಿದೆ.ಎಲುಷನ್ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿನ EDTA ವರ್ಗಾವಣೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಮಧ್ಯಪ್ರವೇಶಿಸುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 500 ng/µl ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಮೌಸ್ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳನ್ನು 6-ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಪೂರ್ಣ RPMI 1640 ಮಧ್ಯಮ (ಜೈವಿಕ ಉದ್ಯಮಗಳು) 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ನಂತರ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಚ್ಚಗಿನ PBS ನಲ್ಲಿ 3 ಬಾರಿ ತೊಳೆದು ಪೆನ್ಸಿಲಿನ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟ್ರೆಪ್ಟೊಮೈಸಿನ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಮಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಸಂಪೂರ್ಣ ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಪೂರಕವಾಗಿದೆ.ಎಂಡೋಟಾಕ್ಸಿನ್-ಮುಕ್ತ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳು pcDNA3.1(+)-alpha-2 ಮತ್ತು pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) 125 μl Opti-MEM ಕಡಿಮೆಯಾದ ಸೀರಮ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ (ಗಿಬ್ಕೊ, ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್) ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ..ನಂತರ 5 µl ಲಿಪೊಫೆಕ್ಟಮೈನ್ 2000 ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫೆಕ್ಷನ್ ಕಾರಕವನ್ನು (ಇನ್ವಿಟ್ರೋಜನ್, ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್) 125 µl ಕಡಿಮೆ ಸೀರಮ್ ಆಪ್ಟಿ-MEM ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.ಲಿಪೊಫೆಕ್ಟಮೈನ್ 2000 ನೊಂದಿಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿದ ಎಂಡೋಟಾಕ್ಸಿನ್-ಮುಕ್ತ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಅನ್ನು ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಲಿಪೊಸೋಮ್-ಡಿಎನ್ಎ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ ಮತ್ತು ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ನಿಲ್ಲುವಂತೆ ಮಾಡಿ.ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಯಲ್ಲಿನ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ ಮತ್ತು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.4 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ, ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು 2 ಮಿಲಿ ಸಂಪೂರ್ಣ RPMI 1640 ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯನ್ನು 24 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಮುಂದುವರಿಸಲಾಯಿತು.ತಾಜಾ ಕೋಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ವಿನ್ಯಾಸವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ವಿವಿಧ ಸಮಯದ ಬಿಂದುಗಳಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಸೆಲ್ ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಗಿದೆ [25].ಪ್ರೊ-IL-1β, ಪ್ರೊ-ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1, ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 p20, NLRP3, β-ಆಕ್ಟಿನ್ ಮತ್ತು ಹಿಸ್-ಟ್ಯಾಗ್‌ಗಾಗಿ ಮೆಂಬರೇನ್ ವರ್ಗಾವಣೆ ನಿಯತಾಂಕಗಳು 200 mA/90 ನಿಮಿಷಗಳು.ಇಂಟರ್ಲ್ಯೂಕಿನ್ 1β (IL-1β; R&D ಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್, ಮಿನ್ನಿಯಾಪೋಲಿಸ್, ಮಿನ್ನೇಸೋಟ, USA), ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 (p20) (ಅಡಿಪೋಜೆನ್, ಸ್ವಿಟ್ಜರ್ಲೆಂಡ್) ಮತ್ತು NLRP3 (ಅಡಿಪೋಜೆನ್ SA, ಎಪಾಲಿಂಗೆಸ್, ಸ್ವಿಟ್ಜರ್ಲೆಂಡ್) ಮತ್ತು 1:5000 (Amyific, Amylet, targeting His Scient) ವುಹಾನ್, ಚೀನಾ) ಮತ್ತು β-ಆಕ್ಟಿನ್ (ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಟೆಕ್, ವುಹಾನ್, ಚೀನಾ).
ಡಿಸುಸಿನಿಮೈಡ್ ಸಬ್‌ರೇಟ್ (ಡಿಎಸ್‌ಎಸ್) ನೊಂದಿಗೆ ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ನಡೆಸಲಾಯಿತು [26].ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕೋಲ್ಡ್ PBS ನೊಂದಿಗೆ 3 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES ಮತ್ತು 125 mM NaHCO3 ಹೊಂದಿರುವ 50 µl ASC ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಬಫರ್ (pH 8.0) ನಲ್ಲಿ 27 ಗೇಜ್ ಸೂಜಿಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಲೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು 3 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 5000 ಗ್ರಾಂನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪೆಲೆಟ್ ಅನ್ನು 10 µl DSS (DMSO ನಲ್ಲಿ 25 mM) ಮತ್ತು 37 ° C ನಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 40 µl ASC ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಹೊಲಿಯಲಾಯಿತು.10 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 5000 ಗ್ರಾಂನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ನಂತರ, 40 µl ASC ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಬಫರ್ ಮತ್ತು 10 µl 6x ಪ್ರೋಟೀನ್ ಲೋಡಿಂಗ್ ಬಫರ್ (ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಜೆನ್, ಬೀಜಿಂಗ್, ಚೀನಾ) ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 15 ಕ್ಕೆ ತಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ನಿಮಿಷ, ನಂತರ 10 ನಿಮಿಷ ಕುದಿಸಿ.ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ನಂತರ 1:500 ರ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ವಿರೋಧಿ ASC ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು (ವಾನ್ಲಿಬಿಯೊ, ಶೆನ್ಯಾಂಗ್, ಚೀನಾ) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪಾಶ್ಚಾತ್ಯ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್‌ಗೆ ಒಳಪಡಿಸಲಾಯಿತು.
ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ [13], ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಮೌಸ್ IL-1 ಬೀಟಾ ELISA ಕಿಟ್ (ಇನ್ವಿಟ್ರೋಜೆನ್, ಥರ್ಮೋ ಫಿಶರ್ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್) ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರೊ-ಇನ್‌ಫ್ಲಮೇಟರಿ ಸೈಟೋಕಿನ್ IL-1β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.IL-1β ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಕರ್ವ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು OD450nm ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ ಪರಿವರ್ತಿಸಿ.
ಕವರ್‌ಸ್ಲಿಪ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಲೇಪಿತವಾದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಚ್ಚಗಿನ PBS ನಲ್ಲಿ 3 ಬಾರಿ ನಿಧಾನವಾಗಿ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಂಗಾಂಶ ಕೋಶದ ಸ್ಥಿರೀಕರಣದಲ್ಲಿ (ಬಯೋಶಾರ್ಪ್, ಬೀಜಿಂಗ್, ಚೀನಾ) 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೊಠಡಿ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ (RT), 0.1% ಟ್ರೈಟಾನ್ X-Permeabilize ನಲ್ಲಿ 100 (PBS ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ಬಯೋಶಾರ್ಪ್) ) ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 5% ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್ (PBS ನಲ್ಲಿ) ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ಬಂಧಿಸಿ.ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ನಂತರ ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 4 ° C ನಲ್ಲಿ ASC (1:100 ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆ) ಅಥವಾ NLRP3 (1:100 ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆ) ವಿರುದ್ಧ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು Cy3 ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಿದ ಮೇಕೆ ವಿರೋಧಿ IgG(H+L) (1:400; EarthOx , ಸ್ಯಾನ್ ಫ್ರಾನ್ಸಿಸ್ಕೋ, CA, USA) ಅಥವಾ FITC-ಸಂಯೋಜಿತ ಮೇಕೆ ಆಂಟಿ-ಮೌಸ್ IgG (1:400; Earthox) ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 37 ° C ನಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆ ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ.ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ Hoechst 33258 (10 μg/ml; UE, ಸುಝೌ, ಚೀನಾ) ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ (ಒಲಿಂಪಸ್ ಕಾರ್ಪೊರೇಷನ್, ಟೋಕಿಯೊ, ಜಪಾನ್) ವೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು.
ಇಲಿಗಳನ್ನು ನಾಲ್ಕು ಗುಂಪುಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ (ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ n = 7): (i) PBS-ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪು (PBS ಮಾತ್ರ; ಗೇವೇಜ್ 100 µl/ಮೌಸ್ PBS ನಂತರ ದೈನಂದಿನ ಇಂಟ್ರಾಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ 100 µl/ಮೌಸ್ PBS 3 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ) ., ನಿರಂತರವಾಗಿ 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ);(ii) MCC950 ಪ್ರತಿರೋಧಕ [27] (100 µl/ಮೌಸ್ PBS ಗ್ಯಾವೇಜ್ ಮೂಲಕ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಗುತ್ತದೆ, 3 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ, 10 mg/kg ದೇಹದ ತೂಕ [BW] MCC950 [PBS ನಲ್ಲಿ] ಪ್ರತಿದಿನ, ಅವಧಿ 7 ದಿನಗಳು);(iii) G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಸೋಂಕಿನ ಗುಂಪು (1.5 x 106 ಚೀಲಗಳು/ಮೌಸ್ ಮೂಲಕ ಗಾವೇಜ್, 3 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ, 100 μl/ಮೌಸ್ PBS ಅನ್ನು 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಪ್ರತಿದಿನ ಇಂಟ್ರಾಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಆಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ);(iv) ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಸಂಯೋಜಿತ ಸೋಂಕಿನ ಗುಂಪು MCC950 ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪು (1.5×106 ಚೀಲಗಳು/ಗಾವೇಜ್ ಮೂಲಕ ಮೌಸ್, 10mg/kg ದೇಹದ ತೂಕ MCC950 ಇಂಟ್ರಾಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಆಗಿ 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ 3h ನಲ್ಲಿ).ಪ್ರತಿ ಇಲಿಯ ದೇಹದ ತೂಕವನ್ನು ಪ್ರತಿದಿನ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 7 ನೇ ದಿನದಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ ಇಲಿಗಳನ್ನು ದಯಾಮರಣಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಿದ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ (3 ಸೆಂ.ಮೀ ಉದ್ದ) 1 ಮಿಲಿ ಪಿಬಿಎಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಸಣ್ಣ ತುಂಡುಗಳಾಗಿ ಕತ್ತರಿಸಲಾಯಿತು, ಸಿಸ್ಟ್‌ಗಳು ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 4 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಪಿಬಿಎಸ್‌ನಲ್ಲಿ ನಾಶವಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಜಿ.ಹೆಮಾಟಾಕ್ಸಿಲಿನ್ ಮತ್ತು ಇಯೊಸಿನ್ (H&E) ಕಲೆಗಾಗಿ ತಾಜಾ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ (1 ಸೆಂ.ಮೀ ಉದ್ದ) ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಇಲಿಗಳನ್ನು ಎರಡು ಗುಂಪುಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ: (i) MOCK ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪು ಮತ್ತು (ii) MCC950 ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಗುಂಪು.ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ಐದು ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳಿದ್ದವು (n = 7/ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಗುಂಪು): (i) PBS ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪು (PBS ಮಾತ್ರ; 100 µl/ಮೌಸ್ PBS, ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ (IM) ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ (ಟಿಬಿಯಾಲಿಸ್ ಆಂಟೀರಿಯರ್) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪು (100 µg/ಮೌಸ್ DNA, ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಮೂಲಕ); ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 (100 μg/ಮೌಸ್ DNA, ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಮೂಲಕ) ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಗುಂಪು, ಮತ್ತು (v) ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (100 µg/ಮೌಸ್) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಗುಂಪು ಡಿಎನ್‌ಎ, 12 ಗಂಟೆಗಳ ಅಂಗೀಕಾರದ ನಂತರ, MCC950 ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿರುವ ಇಲಿಗಳು 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ MCC950 (10 mg/kg ದೇಹದ ತೂಕ) ಯ ದೈನಂದಿನ ಇಂಟ್ರಾಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಅನ್ನು ಸ್ವೀಕರಿಸಿದವು, ಆದರೆ MOCK ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿರುವ ಇಲಿಗಳು ಸಮಾನ ಪ್ರಮಾಣದ PBS ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ಪಡೆದವು. ರಕ್ತದ ಮಾದರಿಗಳು ಕಣ್ಣುಗುಡ್ಡೆಗಳ ಇಲಿಗಳಿಂದ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 4 °C ನಲ್ಲಿ ರಾತ್ರಿಯ ಸೀರಮ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಕಿಣ್ವ-ಸಂಯೋಜಿತ ಇಮ್ಯುನೊಸಾರ್ಬೆಂಟ್ ಅಸ್ಸೇ (ELISA) ಗಾಗಿ ಮತ್ತು IL-1β ಮಟ್ಟಗಳ ಅಳತೆಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಮೂವತ್ತೈದು ಇಲಿಗಳನ್ನು ಐದು ಗುಂಪುಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ (n=7/ಗುಂಪು).ಗುಂಪು 1 ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪು PBS ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು: ಇಲಿಗಳು 100 μl PBS ಅನ್ನು ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಆಗಿ ಮತ್ತು 3 ದಿನಗಳ ನಂತರ ಗವೇಜ್ ಮೂಲಕ ಸ್ವೀಕರಿಸಿದವು.ಗುಂಪು 2 G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್‌ಗಳಿಂದ ಸೋಂಕಿತವಾಗಿರುವ ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಾಗಿದೆ: ಇಲಿಗಳಿಗೆ 100 μl PBS ನೊಂದಿಗೆ ಚುಚ್ಚಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು 3 ದಿನಗಳ ನಂತರ 1.5 x 106 ಚೀಲಗಳು/ಮೌಸ್ ಅನ್ನು ಇಂಟ್ರಾಗ್ಯಾಸ್ಟ್ರಿಕ್ ಆಗಿ ಚುಚ್ಚಲಾಯಿತು.ಮೂರನೇ ಗುಂಪು - ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಸೋಂಕಿನ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ pcDNA3.1 (+) ಜೊತೆಗೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣೆ: ಇಲಿಗಳು 100 μg ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA pcDNA3.1(+)(im) ಮೌಖಿಕವಾಗಿ, 1.5×106 ಚೀಲಗಳು/ಮೌಸ್ 3 ಹಲವಾರು ದಿನಗಳು.ಗುಂಪುಗಳು 4 ಮತ್ತು 5 ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಸೋಂಕಿನ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ ಮರುಸಂಯೋಜಿತ pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಅಥವಾ pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್.ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಗುಂಪು: ಇಲಿಗಳು 100 μg pcDNA3 ಅನ್ನು ಸ್ವೀಕರಿಸಿದವು.1(+)-ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA (im), ನಂತರ 3 ದಿನಗಳ ನಂತರ, 1.5 × 106 ಚೀಲಗಳು/ಮೌಸ್ ಅನ್ನು ಗವೇಜ್ ಮೂಲಕ ಚುಚ್ಚಲಾಯಿತು.ಟ್ಯೂಬ್ ಮೂಲಕ ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಅನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಿದ ನಂತರ ಪ್ರತಿ ಇಲಿಯ ದೇಹದ ತೂಕವನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು.ತಾಜಾ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಅನ್ನು ಪರಾವಲಂಬಿ ಲೋಡ್ ಮಾಪನಗಳು ಮತ್ತು HE ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಹಿಸ್ಟೋಪಾಥೋಲಾಜಿಕಲ್ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಹಿಂದೆ ಪ್ರಕಟಿಸಿದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಪ್ರಕಾರ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ [30].ತಾಜಾ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಅನ್ನು ಟಿಶ್ಯೂ ಸೆಲ್ ಫಿಕ್ಸೆಟಿವ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ, ಪ್ಯಾರಾಫಿನ್‌ನಲ್ಲಿ ಹುದುಗಿದೆ, 4 μm ವಿಭಾಗಗಳಾಗಿ ಕತ್ತರಿಸಿ, H&E ನೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಬೆಳಕಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ಏಳು ಸ್ವತಂತ್ರ ಇಲಿಗಳಿಂದ ಏಳು ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿನ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಬಗ್ಗೆ ತಿಳಿದಿಲ್ಲದ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರಜ್ಞರಿಂದ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲ್ಪಟ್ಟವು ಮತ್ತು 200x ವರ್ಧನೆಯಲ್ಲಿ ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲ್ಪಟ್ಟವು.ವಿಲ್ಲಿಯ ಉದ್ದ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳ ಆಳವನ್ನು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.
ವಿಟ್ರೊ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿವೊ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಮೂರು ಬಾರಿ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.ಗ್ರಾಫ್‌ಪ್ಯಾಡ್ ಪ್ರಿಸ್ಮ್ 7.00 (ಗ್ರಾಫ್‌ಪ್ಯಾಡ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಇಂಕ್., ಲಾ ಜೊಲ್ಲಾ, ಸಿಎ, ಯುಎಸ್‌ಎ) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಗ್ರಾಫ್‌ಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ.ಎರಡು ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು t-ಪರೀಕ್ಷೆಯಿಂದ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ≥3 ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು SPSS ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (ಆವೃತ್ತಿ 22.0; SPSS IBM ಕಾರ್ಪೊರೇಷನ್, ಅರ್ಮಾಂಕ್, NY, USA) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಏಕಮುಖ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ANOVA) ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ಬೋನ್‌ಫೆರೋನಿಯ ಪೋಸ್ಟ್ ಹಾಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆ (B) ನಂತರ ಲೆವೆನ್‌ನ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಏಕರೂಪತೆಗಾಗಿ ಡೇಟಾವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆಯನ್ನು P<0.05, P<0.01, ಮತ್ತು P<0.001 (ಗಮನಾರ್ಹವಲ್ಲ [ns]) (P>0.05) ಎಂದು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಕ್ಯೋಟೋ ಎನ್‌ಸೈಕ್ಲೋಪೀಡಿಯಾ ಆಫ್ ಜೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಜೀನೋಮ್ಸ್ (ಕೆಇಜಿಜಿ) ಯಲ್ಲಿನ GEV ಪ್ರೋಟಿಯೊಮಿಕ್ಸ್‌ನ ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಉರಿಯೂತದ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳ [13] ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರಬಹುದು ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ.ನಾವು ಎರಡು ಭರವಸೆಯ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ, ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳು, ಈ ಅಣುಗಳನ್ನು ವರ್ಧಿಸುತ್ತೇವೆ ಮತ್ತು pcDNA3.1(+) ಯುಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವೆಕ್ಟರ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಲು ಅವುಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತೇವೆ.ಅನುಕ್ರಮದ ನಂತರ, ಮರುಸಂಯೋಜಕ pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಶನ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಮೌಸ್ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಾಗಿ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತದ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 p20 ಸಿಗ್ನೇಚರ್ ಪ್ರೊಟೀನ್ (ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ರ ತುಣುಕು) ಅನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ. ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸುವ ಪ್ರಮುಖ ಅಣುಗಳನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸುವಂತೆ.ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯರ್ಡೈನ್‌ಗಳು GEV ಯಂತೆಯೇ p20 ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಬಹುದು ಎಂದು ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ.ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ (PBS ಮಾತ್ರ) ಮತ್ತು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ನಿಯಂತ್ರಣ pcDNA3.1(+) (ಚಿತ್ರ 1) ನಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಯಾವುದೇ ಪರಿಣಾಮ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 ಮತ್ತು alpha-7.3 giardins ಮೂಲಕ p20 ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಮಾಪನ.ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಯೂಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳು pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ಗಳನ್ನು (ಪ್ರತಿ ಲೇನ್‌ನ ಮೇಲೆ) ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಮೌಸ್ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕಲ್ಚರ್ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್‌ಗಳನ್ನು 24 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಲಾಯಿತು.ಸಿಗ್ನೇಚರ್ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 p20 ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಅಳೆಯಲು ಪಾಶ್ಚಾತ್ಯ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.PBS-ಮಾತ್ರ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪು (ಲೇನ್ C) ಮತ್ತು pcDNA3.1(+) ಮೊನೊಥೆರಪಿ ಗುಂಪು (pcDNA3.1 ಲೇನ್) ಅನ್ನು ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು GEV ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪನ್ನು ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರತಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನಲ್ಲಿ ಹಿಸ್ಟಿಡಿನ್ ಟ್ಯಾಗ್ ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವ ಮೂಲಕ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ದೃಢೀಕರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ ಮತ್ತು ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳು ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ (38.2 kDa) ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ (37.2 kDa).GEV, ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಡ್ಯುಯೊಡಿನಮ್ ಎಕ್ಸ್‌ಟ್ರಾಸೆಲ್ಯುಲರ್ ವೆಸಿಕಲ್ಸ್, pcDNA3.1(+), EcoRV-ಲೀನಿಯರೈಸ್ಡ್ ವೆಕ್ಟರ್, SUP, ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್
ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ p20 ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆಯೇ ಮತ್ತು ಆತಿಥೇಯ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಲ್ಲಿ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ಮತ್ತು pcDNA3.1(+)-alpha -7.3 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಅನ್ನು ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯೊಂದಿಗೆ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಮೌಸ್ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪ್ರಮುಖ ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ 3 ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ, ಸ್ಥಳೀಕರಣ ಮತ್ತು ಆಲಿಗೊಮೆರೈಸೇಶನ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.ಈ ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ, GEV ಅನ್ನು ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಗುಂಪು (PBS ಮಾತ್ರ) ಅಥವಾ pcDNA3.1(+) ವರ್ಗಾವಣೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಗುಂಪು ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಗುಂಪು.ಫಲಿತಾಂಶಗಳು GEV ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿರುವಂತೆ, ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ನ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA NLRP3, ಪರ-IL-1β ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು. ಪ್ರೊಕಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ (Fig. 2a).ಜೊತೆಗೆ, ಎರಡೂ ಗಿಯರ್ಡೈನ್‌ಗಳು ಗಮನಾರ್ಹವಾದ IL-1β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.00 );ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯರ್ಡೈನ್: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (ಚಿತ್ರ 2b).ಹೆಚ್ಚಿನ ASC ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳು ಯಾವುದೇ-ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ಅಥವಾ pcDNA3.1(+) ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ವರ್ಗಾವಣೆಗೊಂಡ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ಮೊನೊಮೆರಿಕ್ ಆಗಿದ್ದು, pcDNA3.1(+)-alpha-2 ಅಥವಾ pcDNA3.1(+)-alpha- 7.3 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್.GEV ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪು ಅಥವಾ ಗುಂಪಿನ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA ಯಲ್ಲಿ ASC ಆಲಿಗೋಮೆರೈಸೇಶನ್ ಸಂಭವಿಸಿದೆ, ಇದು ಆಲಿಗೋಮೆರಿಕ್ ರೂಪವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 2c).ಈ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಮಾಹಿತಿಯು ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7,3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ 3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ASC ಮತ್ತು NLRP3 ನ ಸ್ಥಳೀಕರಣದ ನಂತರದ ಇಮ್ಯುನೊಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ, ASC ಪ್ರೊಟೀನ್ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂನಾದ್ಯಂತ ಹರಡಿಕೊಂಡಿದೆ ಮತ್ತು ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಅಥವಾ pcDNA3 ನೊಂದಿಗೆ pcDNA3.1(+)-alpha-2 ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಿದ ಮೇಲೆ ಡಾಟ್ ಸಂಕೇತವಾಗಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-7,3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಗುಂಪು ಅಥವಾ GEV ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪು (ಚಿತ್ರ 2d).ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್-ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ pcDNA 3.1 ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿ, NLRP3 ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಪತ್ತೆಯಾಗಿಲ್ಲ, ಆದರೆ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ಅಥವಾ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಿಗ್ನಲ್ ಡಾಟ್ ಪತ್ತೆಯಾಯಿತು..ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂನಲ್ಲಿ ಅಥವಾ HEV ಯ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಮೇಲೆ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 2e).G. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್ ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಮೌಸ್ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಈ ಡೇಟಾವು ಮತ್ತಷ್ಟು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin ಮತ್ತು pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಮೌಸ್ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಯುಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳನ್ನು pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಮತ್ತು pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಮ್ಯೂರಿನ್ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಕೋಶಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ ಅಥವಾ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ 24 ಗಂಟೆಯೊಳಗೆ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಕೊಯ್ಲು, ಆಲಿಗೊಮೆರೈಸೇಶನ್ , ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆ.ಮತ್ತು ಪ್ರಮುಖ ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳ ಸ್ಥಳೀಕರಣ.PBS-ಮಾತ್ರ (C) ಗುಂಪು ಮತ್ತು pcDNA3.1(+) ಏಕ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪನ್ನು ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು GEV ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪನ್ನು ಧನಾತ್ಮಕ ಗುಂಪಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು.ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ3, ಪ್ರೊ-ಐಎಲ್-1β, ಪ್ರೊ-ಕ್ಯಾಸ್‌ಪೇಸ್-1, ಮತ್ತು ಪಿ20 ಕ್ಯಾಸ್‌ಪೇಸ್-1 ಸೇರಿದಂತೆ ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ3 ಪ್ರಮುಖ ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪಾಶ್ಚಾತ್ಯ ಬ್ಲಾಟಿಂಗ್‌ನಿಂದ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಯಿತು.b ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ IL-1β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಕಿಣ್ವ-ಸಂಯೋಜಿತ ಇಮ್ಯುನೊಸಾರ್ಬೆಂಟ್ ಅಸ್ಸೇ (ELISA) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು SPSS ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಆವೃತ್ತಿ 22.0 ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಏಕಮುಖ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ANOVA) ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು **P<0.01 ಮತ್ತು ***P<0.001 ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.ಸಿ ಉಂಡೆಗಳಲ್ಲಿನ ASC ಆಲಿಗೊಮೆರೈಸೇಶನ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು DSS ಕ್ರಾಸ್-ಲಿಂಕಿಂಗ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಸೆಲ್ ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ASC ಮಟ್ಟವನ್ನು ಲೋಡಿಂಗ್ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.d ಇಮ್ಯುನೊಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ISC ಸ್ಥಳೀಕರಣದ ದೃಶ್ಯೀಕರಣ.e ಇಮ್ಯುನೊಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಅನ್ನು NLRP3 ನ ಸ್ಥಳೀಕರಣವನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು.ASC, ಅಪೊಪ್ಟೋಟಿಕ್ ಸ್ಪೆಕ್ ತರಹದ ಪ್ರೋಟೀನ್;IL, ಇಂಟರ್ಲ್ಯೂಕಿನ್;NLRP3, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಆಲಿಗೋಮೆರೈಸೇಶನ್ ತರಹದ ಗ್ರಾಹಕ 3;ns, ಗಮನಾರ್ಹವಲ್ಲ (P > 0.05)
G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಮತ್ತು ಇದು ಸ್ರವಿಸುವ GEV ಗಳು NLRP3 ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಿಟ್ರೋದಲ್ಲಿ ಹೋಸ್ಟ್ ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ.ಹೀಗಾಗಿ, G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್‌ನ ರೋಗಕಾರಕತೆಯಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಪಾತ್ರವು ಅಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿಯೇ ಉಳಿದಿದೆ.ಈ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಲು, ನಾವು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಸೋಂಕಿತ ಇಲಿಗಳು ಮತ್ತು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ + MCC950 ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಿಂದ ಸೋಂಕಿತವಾಗಿರುವ ಇಲಿಗಳ ನಡುವೆ ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾದಾಗ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೋಲಿಸಿದ್ದೇವೆ.ಪ್ರಯೋಗದ ವಿವರವಾದ ಯೋಜನೆಯನ್ನು ಚಿತ್ರ 3a ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ವಿವಿಧ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿನ ಇಲಿಗಳ ದೇಹದ ತೂಕದಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಚೀಲಗಳ ಸೋಂಕಿನ ನಂತರ 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಅಂಜೂರ 3b ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಶುದ್ಧ PBS ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿದವು (i) G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಸೋಂಕಿತ ಇಲಿಗಳ ದೇಹದ ತೂಕವು ಸೋಂಕಿನ ನಂತರ 3 ರಿಂದ 7 ನೇ ದಿನಕ್ಕೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ;(ii) MCC950 ಪ್ರತಿರೋಧಕದೊಂದಿಗಿನ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಇಲಿಗಳ ದೇಹದ ತೂಕದ ಮೇಲೆ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರಲಿಲ್ಲ..ಏಕ ಸೋಂಕಿನ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, MCC950 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಸೋಂಕಿನ ಗುಂಪಿನ BW ವಿವಿಧ ಹಂತಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ (ದಿನ 1: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148; ದಿನ 2: ANOVA, F( 3, 24 ) = 0.4602, P<0.0001; ದಿನ 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; ದಿನ 4: ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052; (3, 24)=0.6497, P=0.0645; ದಿನ 6: ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175; ದಿನ 7: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202).ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಸೋಂಕಿನ ಆರಂಭಿಕ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ (2-4 ದಿನಗಳು) ಗಮನಾರ್ಹವಾದ ತೂಕ ನಷ್ಟದಿಂದ NLRP3 ಉರಿಯೂತವು ಇಲಿಗಳನ್ನು ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಈ ಡೇಟಾವು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.ನಾವು ನಂತರ ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಲ್ಯಾವೆಜ್ ದ್ರವದಲ್ಲಿ G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಗುರಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಚಿತ್ರ 3c ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಸೋಂಕಿನ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, NLRP3 ಉರಿಯೂತವನ್ನು (t(12) = 2.902, P = 0.0133) ನಿರ್ಬಂಧಿಸಿದ ನಂತರ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್‌ನಲ್ಲಿನ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ.ಕೇವಲ PBS ಮತ್ತು MCC950 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾದ ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ HE ಯೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣಬಣ್ಣದ ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಅಂಗಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿದವು: (i) G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಸೋಂಕು ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ವಿಲ್ಲಿಗೆ ಹಾನಿಯನ್ನುಂಟುಮಾಡಿತು (ANOVA, F(3, 24)=0.4903, P= 0.0488 ) ಮತ್ತು ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಕ್ಷೀಣತೆ (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್‌ಗಳಿಂದ ಸೋಂಕಿತ ಇಲಿಗಳಿಂದ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಮತ್ತು MCC950 ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ವಿಲ್ಲಿ ಹಾನಿಗೊಳಗಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸತ್ತಿದೆ (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) ಕ್ಷೀಣತೆ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಶಾಖೆಯೊಂದಿಗೆ (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (Fig. 3d- f)G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್‌ನ ರೋಗಕಾರಕತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತವು ಒಂದು ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.
ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಸೋಂಕಿನಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಪಾತ್ರ.ಇಲಿಗಳನ್ನು ಡ್ಯುಯೊಡೆನೊಕೊಕಲ್ ಸಿಸ್ಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ (iv) ಗ್ಯಾವೇಜ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ MCC950 (ip) ನೊಂದಿಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು.PBS ಅಥವಾ MCC950 ಜೊತೆಗಿನ ಏಕ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಣಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಕಟ್ಟುಪಾಡು.b ವಿವಿಧ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿ ಇಲಿಗಳ ದೇಹದ ತೂಕವನ್ನು 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು.G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕಿನ ಗುಂಪು ಮತ್ತು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ + MCC950 ಸೋಂಕಿನ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪಿನ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು SPSS ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಆವೃತ್ತಿ 22.0 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು t-ಪರೀಕ್ಷೆಯ ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು *P<0.05, **P<0.01, ಅಥವಾ ***P<0.001 ನಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.c ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಲ್ಯಾವೆಜ್ ದ್ರವದಲ್ಲಿ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಎಣಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪರಾವಲಂಬಿ ಹೊರೆ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕಿನ ಗುಂಪು ಮತ್ತು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ + MCC950 ಸೋಂಕಿನ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪಿನ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು SPSS ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಆವೃತ್ತಿ 22.0 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು t-ಪರೀಕ್ಷೆಯ ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು *P <0.05 ನಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.d ಹೆಮಾಟಾಕ್ಸಿಲಿನ್ ಮತ್ತು ಇಯೊಸಿನ್ (H&E) ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಹಿಸ್ಟೋಪಾಥಾಲಜಿಯ ಸ್ಟೆನಿಂಗ್ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು.ಕೆಂಪು ಬಾಣಗಳು ವಿಲ್ಲಿಗೆ ಹಾನಿಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಹಸಿರು ಬಾಣಗಳು ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಹಾನಿಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್: 100 µm.e, f ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ವಿಲ್ಲಸ್ ಎತ್ತರ ಮತ್ತು ಮೌಸ್ ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಎತ್ತರದ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು *P<0.05 ಮತ್ತು **P<0.01 ನಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು 7 ಸ್ವತಂತ್ರ ಜೈವಿಕ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಂದ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ.BW, ದೇಹದ ತೂಕ;ig, ಇಂಟ್ರಾಗ್ಯಾಸ್ಟ್ರಿಕ್ ವಿತರಣಾ ಮಾರ್ಗ;ಐಪಿ, ಇಂಟ್ರಾಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ವಿತರಣಾ ಮಾರ್ಗ;ns, ಗಮನಾರ್ಹವಲ್ಲ (P > 0.05);PBS, ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ಡ್ ಸಲೈನ್;WT, ಕಾಡು ಪ್ರಕಾರ
IL-1β ನ ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯು ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ವಿಶಿಷ್ಟ ಲಕ್ಷಣವಾಗಿದೆ.G. duodenalis alpha-2 giardine ಮತ್ತು alpha-7.3 giardine ವಿವೋದಲ್ಲಿ NLRP3 ಹೋಸ್ಟ್ ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, ನಾವು ಸಂಸ್ಕರಿಸದ WT ಇಲಿಗಳು (ಶ್ಯಾಮ್ ಗುಂಪು) ಮತ್ತು NLRP3 ಉರಿಯೂತ-ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಇಲಿಗಳನ್ನು (MCC950 ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಿದ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪು) ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ.ಪ್ರಯೋಗದ ವಿವರವಾದ ಯೋಜನೆಯನ್ನು ಚಿತ್ರ 4a ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಗುಂಪುಗಳು PBS, G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಟ್ರೀಟ್ಮೆಂಟ್, ಪಿಸಿಡಿಎನ್ಎ3.1 ನ ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಮತ್ತು pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಅಥವಾ pcDNA3.1-ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ನ ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿವೆ.ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ನ ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಆಡಳಿತದ ನಂತರ 7 ನೇ ದಿನದಂದು, ಸೀರಮ್ ಅನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿನ IL-1β ಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಚಿತ್ರ 4b ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, MOCK ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ: (i) PBS ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, pcDNA3.1 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು IL-1β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಯಾವುದೇ ಮಹತ್ವದ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರಲಿಲ್ಲ (ANOVA, F(4.29)=4.062, P=0.9998), ಆದಾಗ್ಯೂ, IL-β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine ಮತ್ತು pcDNA3 ನಲ್ಲಿ ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು.1- ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ನ ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಸೀರಮ್ IL-1β ಮಟ್ಟವನ್ನು ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿದೆ (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ pcDNA3.1-alpha-2 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ IL -1β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಿತು (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0333) .MCC950 ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪು ಮತ್ತು MOCK ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿರುವ ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ: (i) PBS ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪು ಮತ್ತು pcDNA3.1 ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿನ IL-1β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯ ಮಟ್ಟಗಳು MCC950 ಪ್ರತಿಬಂಧಕವನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸಿದ ನಂತರ ಸ್ವಲ್ಪ ಮಟ್ಟಿಗೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ಇರಲಿಲ್ಲ ಗಮನಾರ್ಹ (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) MCC950 ಅನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸಿದ ನಂತರ., IL-1β ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್-ಸೋಂಕಿತ ಗುಂಪು, pcDNA3.1-ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಗುಂಪು, ಮತ್ತು pcDNA3.1-ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ (G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್: ANOVA, F(9) ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ. , 58) = 3.540 , ಪಿ = 0.0120 ) = 3.540, P = 0.0164).ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ವಿವೋದಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.
pcDNA3.1(+)-ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ಗಳು ವಿವೋದಲ್ಲಿ NLRP3 ಹೋಸ್ಟ್ ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ.ಇಲಿಗಳಿಗೆ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಯುಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಅಥವಾ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ರೋಗನಿರೋಧಕ (IM) ನೀಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ MCC950 (ip; MCC950 ಗುಂಪು) ಅಥವಾ (ಡಮ್ಮಿ ಗುಂಪು) ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಯಿತು. )PBS ಅಥವಾ pcDNA3.1(+) ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪನ್ನು ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು, G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಟ್ರೀಟ್ಮೆಂಟ್ ಗುಂಪನ್ನು ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಕಟ್ಟುಪಾಡು.b ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ IL-1β ನ ಸೀರಮ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ELISA ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ದಿನ 7 ರಂದು ಅಳೆಯಲಾಯಿತು.MOCK ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿರುವ ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಏಕಮುಖ ANOVA ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು MOCK ಗುಂಪು ಮತ್ತು MCC950 ಗುಂಪಿನ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು SPSS ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಆವೃತ್ತಿ 22.0 ನ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.MOCK ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿನ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, *P<0.05 ಮತ್ತು ***P<0.001;ಡಾಲರ್ ಚಿಹ್ನೆಗಳು ($) MOCK ಗುಂಪು ಮತ್ತು MCC950 ಗುಂಪು P<0.05 ನಲ್ಲಿನ ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿನ ನಡುವಿನ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.ಏಳು ಸ್ವತಂತ್ರ ಜೈವಿಕ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು.i, ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್, ns, ಗಮನಾರ್ಹವಲ್ಲ (P > 0.05)
G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕಿನ ಮೇಲೆ NLRP3 ಹೋಸ್ಟ್ ಉರಿಯೂತದ ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಲು, ನಾವು WT C57BL/6 ಇಲಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಅನ್ನು ಚುಚ್ಚಿದ್ದೇವೆ.ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಅನ್ನು ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್‌ನ ಗ್ಯಾಸ್ಟ್ರಿಕ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಮೂಲಕ 3 ದಿನಗಳ ನಂತರ ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಆಗಿ ಚುಚ್ಚಲಾಯಿತು, ನಂತರ ಇಲಿಗಳನ್ನು 7 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರಯೋಗದ ವಿವರವಾದ ಯೋಜನೆಯನ್ನು ಚಿತ್ರ 5a ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರತಿ ಇಲಿಯ ದೇಹದ ತೂಕವನ್ನು ಪ್ರತಿದಿನ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಗ್ಯಾಸ್ಟ್ರಿಕ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಮೂಲಕ ಆಡಳಿತದ ನಂತರ 7 ನೇ ದಿನದಂದು ತಾಜಾ ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಅಂಗಾಂಶದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಟ್ರೋಫೋಜೋಯಿಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹಿಸ್ಟೋಪಾಥೋಲಾಜಿಕಲ್ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.ಚಿತ್ರ 5b ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ಆಹಾರದ ಸಮಯದೊಂದಿಗೆ, ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿರುವ ಇಲಿಗಳ BW ಕ್ರಮೇಣ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು.G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಚೀಲಗಳ ಇಂಟ್ರಾಗ್ಯಾಸ್ಟ್ರಿಕ್ ಆಡಳಿತದ ನಂತರ 3 ನೇ ದಿನದಲ್ಲಿ ಇಲಿಗಳ MT ಕಡಿಮೆಯಾಗಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ ಕ್ರಮೇಣ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು.ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ನ ಇಂಟ್ರಾಮಸ್ಕುಲರ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್‌ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ತೂಕ ನಷ್ಟವನ್ನು ಗಣನೀಯವಾಗಿ ತಗ್ಗಿಸಿತು (ದಿನ 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = P1. = 0 .9754 ದಿನ 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 ದಿನ 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F( 4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; ದಿನ 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409 4 , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, ದಿನ 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, ದಿನ 5: pcDNA3.1-ಆಲ್ಫಾ 2 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 ದಿನ 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 ದಿನ 6: pcDNA alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, ದಿನ 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;ದಿನ 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 Day 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.5369, P <0.0001).ಪರಾವಲಂಬಿ ಲೋಡ್ ಅನ್ನು ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (Fig. 5c).ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಖಾಲಿ pcDNA3.1 ವೆಕ್ಟರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನ ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, α-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು α-7,3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ (pcDNA3.1-ಆಲ್ಫಾ) ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿ G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ. -2 ಗಿಯರ್ಡೈನ್ : ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001).ಜೊತೆಗೆ, ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಆಲ್ಫಾ-2 (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081) ಗಿಂತ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ.HE ಕಲೆಗಳ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಅಂಜೂರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.5d-f.ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ನೊಂದಿಗೆ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನ ಇಲಿಗಳು ಕಡಿಮೆ ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಅಂಗಾಂಶದ ಗಾಯಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದು, ವಿಲ್ಲಸ್ ಹಾನಿಯಿಂದ ವ್ಯಕ್ತವಾಗುತ್ತದೆ, ಜಿ. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್ ಮತ್ತು ಜಿ. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನ ಇಲಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಖಾಲಿ pcDNA3 ವೆಕ್ಟರ್ .1 ಜೂಮ್.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 ಅಥವಾ P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, = 0.0028 ಅಥವಾ P = 0.0055) ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆಯಾದ ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಕ್ಷೀಣತೆ (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 ಅಥವಾ P = 0.0158; pcDNA3.3.1-alphaardine:ANO. , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 ಅಥವಾ P = 0.0191).ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7,3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ವಿವೋದಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್‌ನ ಸೋಂಕನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕಿನಲ್ಲಿ pcDNA3.1(+)-ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳ ಪಾತ್ರ.ಇಲಿಗಳಿಗೆ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಯುಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಶನ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳು pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಅಥವಾ pcDNA3.1(+)-ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣೆ (IM) ನೀಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ G. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್ ಸಿಸ್ಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ (ig) ಸವಾಲು ಹಾಕಲಾಯಿತು.PBS ಗುಂಪು ಮತ್ತು pcDNA3.1(+) + ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಟ್ರೀಟ್ಮೆಂಟ್ ಗ್ರೂಪ್ ಅನ್ನು ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪುಗಳಾಗಿ ಮತ್ತು ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಸಿಸ್ಟ್ ಟ್ರೀಟ್ಮೆಂಟ್ ಗುಂಪನ್ನು ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಕಟ್ಟುಪಾಡು.b ವಿವಿಧ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿ ಇಲಿಗಳ MT ಅನ್ನು 7 ದಿನಗಳ ನಂತರದ ಸವಾಲಿನವರೆಗೆ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಗುಂಪು ಮತ್ತು pcDNA3.1(+)-alpha-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಗುಂಪು, *P <0.05, **P <0.01, ಮತ್ತು ***P <0.001 ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ;ಡಾಲರ್ ಚಿಹ್ನೆಯು ($) G. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್ ಮತ್ತು pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ಜಾರ್ಡಿನ್ ಗುಂಪು, $$P<0.01 ಮತ್ತು $$$P<0.001 ನಡುವಿನ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.c ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್‌ನಿಂದ (3 ಸೆಂ.ಮೀ ಉದ್ದ) 1 ಮಿಲಿ ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಲ್ಯಾವೆಜ್‌ನಲ್ಲಿ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಎಣಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪರಾವಲಂಬಿ ಹೊರೆ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್‌ನ ಪ್ರತಿ ಸೆಂ.ಮೀ.ಗೆ ಪರಾವಲಂಬಿಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕಿನ ಗುಂಪು, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ಗುಂಪು, ಮತ್ತು pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಗುಂಪಿನ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು SPSS ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಆವೃತ್ತಿ 22.0 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು **P<0.01 ಮತ್ತು ***P<0.001 ನಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.d ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ನಲ್ಲಿ ಹಿಸ್ಟೋಲಾಜಿಕಲ್ ಬದಲಾವಣೆಗಳು.ಕೆಂಪು ಬಾಣಗಳು ವಿಲ್ಲಿಗೆ ಹಾನಿಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ, ಹಸಿರು ಬಾಣಗಳು ಕ್ರಿಪ್ಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಹಾನಿಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್: 100 µm.ಇ, ಎಫ್ ಮೌಸ್ ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ವಿಲ್ಲಸ್ ಎತ್ತರ (ಇ) ಮತ್ತು ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಎತ್ತರ (ಎಫ್) ಅಂಕಿಅಂಶಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ.ಚಿತ್ರ 1d ನಲ್ಲಿನ ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು SPSS ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಆವೃತ್ತಿ 22.0 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಏಕಮುಖ ANOVA ಮೂಲಕ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ.ನಕ್ಷತ್ರ ಚಿಹ್ನೆಗಳು *P<0.05 ಮತ್ತು **P<0.01 ನಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.ಏಳು ಸ್ವತಂತ್ರ ಜೈವಿಕ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು.ns, ಗಮನಾರ್ಹವಲ್ಲ (P > 0.05)
ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಡ್ಯುವೋಡೆನಮ್ ಮಾನವರು ಮತ್ತು ಇತರ ಸಸ್ತನಿಗಳ ಕರುಳಿನ ಪರಾವಲಂಬಿಯಾಗಿದ್ದು ಅದು ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.2004 ರಲ್ಲಿ, WHO ನಿರ್ಲಕ್ಷ್ಯದ ರೋಗಗಳ ಇನಿಶಿಯೇಟಿವ್‌ನಲ್ಲಿ 6 ವರ್ಷಗಳಲ್ಲಿ ಅದರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಹರಡುವಿಕೆಯಿಂದಾಗಿ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಸಾಮಾಜಿಕ ಆರ್ಥಿಕ ಸ್ಥಿತಿಯ ಸಮುದಾಯಗಳಲ್ಲಿ [32] ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕಿನ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಜನ್ಮಜಾತ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ.ಮೌಸ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳು ಜಿ. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್‌ ಅನ್ನು ಹೊರಕೋಶದ ಬಲೆಗಳನ್ನು [33] ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಆವರಿಸಿ ಕೊಲ್ಲುತ್ತವೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ.ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು G. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್, ಆಕ್ರಮಣಶೀಲವಲ್ಲದ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಪರಾವಲಂಬಿ, p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, ಮತ್ತು NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳನ್ನು ಮೌಸ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಹೋಸ್ಟ್ ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ GEV ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು.13], 24].ಆದಾಗ್ಯೂ, GEV ನಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತ-ನಿಯಂತ್ರಿತ ಉರಿಯೂತದಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ನಿಖರವಾದ PAMP ಗಳು ಮತ್ತು ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ.ಈ ಎರಡು ಪ್ರಶ್ನೆಗಳ ಮೇಲೆ ಬೆಳಕು ಚೆಲ್ಲಲು, ನಾವು ಈ ಅಧ್ಯಯನವನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ.
NLRP3 ಉರಿಯೂತವು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಕೋಶಗಳ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂನಲ್ಲಿದೆ ಮತ್ತು ಯೂರಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಸ್ಫಟಿಕಗಳು, ವಿಷಗಳು, ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳು, ವೈರಸ್ಗಳು ಮತ್ತು ಪರಾವಲಂಬಿಗಳಂತಹ ವಿವಿಧ ಕಣಗಳಿಂದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು.ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ, ಟಾಕ್ಸಿನ್‌ಗಳು ಉರಿಯೂತದ ಸಂವೇದಕಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಪ್ರಮುಖ PAMP ಗಳಾಗಿ ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಉರಿಯೂತ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ [34].ಸ್ಟ್ಯಾಫಿಲೋಕೊಕಸ್ ಔರೆಸ್ [35] ಮತ್ತು ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ [36], ಎಂಟ್ರೊಟಾಕ್ಸಿನ್ (NHE) ನಿಂದ ಹೆಮೊಲಿಸಿನ್ BL (HBL) [37] ನಂತಹ ಕೆಲವು ರಚನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ವಿಷಗಳು NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ.SARS-COV-2 ಎನ್ವಲಪ್ (E) ಪ್ರೋಟೀನ್ [38] ಮತ್ತು Zika ವೈರಸ್ NS5 ಪ್ರೋಟೀನ್ [39] ನಂತಹ ವೈರಲೆನ್ಸ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು NLRP3 ರಿಸೆಪ್ಟರ್‌ನಿಂದ ಗುರುತಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಪ್ರಮುಖ PAMP ಗಳಾಗಿವೆ ಎಂದು ವೈರಲ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ.ಪರಾವಲಂಬಿ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ, ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿ, ಟ್ರೈಕೊಮೊನಾಸ್ ವಜಿನಾಲಿಸ್ [40], ಟ್ರಿಪನೋಸೋಮಾ ಕ್ರೂಜಿ [41], ಮತ್ತು ಲೀಶ್ಮೇನಿಯಾ [42] ನಂತಹ ಹೋಸ್ಟ್ ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಅನೇಕ ಪರಾವಲಂಬಿಗಳು ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ.ಟೊಕ್ಸೊಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಗೊಂಡಿಯ ವೈರಲೆನ್ಸ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ದಟ್ಟವಾದ ಗ್ರ್ಯಾನ್ಯೂಲ್ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳಾದ GRA35, GRA42 ಮತ್ತು GRA43, ಲೆವಿಸ್ ಇಲಿ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಪೈರೋಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ನ ಪ್ರಚೋದನೆಗೆ ಅಗತ್ಯವಿದೆ [43].ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಕೆಲವು ಲೀಶ್ಮೇನಿಯಾ ಅಧ್ಯಯನಗಳು NLRP3 ಉರಿಯೂತದಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಅಣುಗಳ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಪರಾವಲಂಬಿ ಪೊರೆಯ ಲಿಪೊಫಾಸ್ಫೋಗ್ಲೈಕಾನ್ [44] ಅಥವಾ ಸತು ಮೆಟಾಲೋಪ್ರೊಟೀಸ್ [45].ವಂಶವಾಹಿಗಳ ಅನೆಕ್ಸಿನ್ ತರಹದ ಆಲ್ಫಾ-ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಕುಟುಂಬದ ನಡುವೆ, ಆಲ್ಫಾ-1 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ G. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್ ವಿರುದ್ಧ ರಕ್ಷಣೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಸಂಭಾವ್ಯ ಲಸಿಕೆ ಅಭ್ಯರ್ಥಿ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ [18].ನಮ್ಮ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಾವು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ವೈರಲೆನ್ಸ್ ಅಂಶಗಳಾದ ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7,3 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ, ಇದು ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಕ್ಕೆ ವಿಶಿಷ್ಟವಾಗಿದೆ ಆದರೆ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ವರದಿಯಾಗಿದೆ.ಉರಿಯೂತ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಈ ಎರಡು ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು pcDNA3.1(+) ಯುಕಾರ್ಯೋಟಿಕ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಶನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ವೆಕ್ಟರ್‌ಗೆ ಕ್ಲೋನ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ನಮ್ಮ ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ, ಸೀಳಿರುವ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್ ತುಣುಕುಗಳು ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಗುರುತುಗಳಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ.ಪ್ರಚೋದನೆಯ ನಂತರ, NLRP3 ASC ಯೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುತ್ತದೆ, ಪ್ರೊಕಾಸ್ಪೇಸ್ಗಳನ್ನು ನೇಮಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು IL-1β ಮತ್ತು IL-18 ಅನ್ನು ಪ್ರಬುದ್ಧ IL-1β ಮತ್ತು IL-18 ಆಗಿ ಕ್ರಮವಾಗಿ -18 ಆಗಿ ವಿಭಜಿಸುವ ಸಕ್ರಿಯ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ.ಉರಿಯೂತದ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್‌ಗಳು (ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1, -4, -5 ಮತ್ತು -11) ಸಿಸ್ಟೀನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್‌ಗಳ ಸಂರಕ್ಷಿತ ಕುಟುಂಬವಾಗಿದ್ದು ಅದು ಸಹಜ ರಕ್ಷಣೆಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಗ್ರಾಮ್ ಮಾಡಿದ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿನಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ [46].ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಅನ್ನು ಅಂಗೀಕೃತ ಉರಿಯೂತಗಳು [47] ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್ -4, -5 ಮತ್ತು -11 ವಿಲಕ್ಷಣ ಉರಿಯೂತದ ರಚನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸೀಳಲಾಗುತ್ತದೆ [48].ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ನಾವು ಮೌಸ್ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳನ್ನು ಮಾದರಿಯಾಗಿ ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ ಹೋಸ್ಟ್ NLRP3 ಉರಿಯೂತ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಮಾರ್ಕರ್ ಆಗಿ p20 ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಕ್ಲೀವ್ಡ್ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಅನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ.ಉರಿಯೂತದ ವಿಶಿಷ್ಟ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗೆ ಅನೇಕ ಆಲ್ಫಾ-ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳು ಕಾರಣವೆಂದು ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಮತ್ತು ವೈರಸ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪ್ರಮುಖ ವೈರಲೆನ್ಸ್ ಅಣುಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರದೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ನಮ್ಮ ಅಧ್ಯಯನವು ಕೇವಲ ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪರದೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನವು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಸೋಂಕಿನಲ್ಲಿ ಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಮತ್ತು ಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಲ್ಲದ ಉರಿಯೂತಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿರುವುದರಿಂದ ಶಾಸ್ತ್ರೀಯವಲ್ಲದ ಉರಿಯೂತಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಇತರ ಅಣುಗಳಿವೆ [13].ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾದ p20 ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 NLRP3 ಉರಿಯೂತದೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, ನಾವು α-ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳೆರಡೂ ಸಕ್ರಿಯವಾಗುವುದನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸುವ ಪ್ರಮುಖ ಅಣು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟಗಳು ಮತ್ತು ASC ಆಲಿಗೋಮೆರೈಸೇಶನ್ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ನಾವು ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್‌ಗಳನ್ನು ಮೌಸ್ ಪೆರಿಟೋನಿಯಲ್ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಉರಿಯೂತದ NLRP3.ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು Manko-Prykhoda et al ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗಿಂತ ಸ್ವಲ್ಪ ಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ. ಅವರು G. ಮುರಿಸ್ ಅಥವಾ E. ಕೊಲಿ EPEC ತಳಿಗಳೊಂದಿಗೆ Caco-2 ಜೀವಕೋಶಗಳ ಪ್ರಚೋದನೆಯು NLRP3, ASC ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಿದೆ. ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಅಲ್ಲದಿದ್ದರೂ, G. ಮುರಿಸ್ ಮತ್ತು E. ಕೋಲಿಯ ಕಾಸ್ಟಿಮ್ಯುಲೇಶನ್ ಮೂರು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೇಗೆ ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು [49].ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಪ್ರಭೇದಗಳು, ಕೋಶ ರೇಖೆಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಕೋಶಗಳ ಆಯ್ಕೆಯಲ್ಲಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳಿಂದಾಗಿರಬಹುದು.ನಾವು 5-ವಾರದ ಹೆಣ್ಣು WT C57BL/6 ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ MCC950 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿವೋ ಅಸ್ಸೇಸ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸಹ ಪ್ರದರ್ಶನ ನೀಡಿದ್ದೇವೆ, ಇದು G. ಡ್ಯುಯೊಡೆನಾಲಿಸ್‌ಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಒಳಗಾಗುತ್ತದೆ.MCC950 ಒಂದು ಪ್ರಬಲವಾದ ಮತ್ತು ಆಯ್ದ ಸಣ್ಣ ಅಣುವಿನ NLRP3 ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿದ್ದು ಅದು ನ್ಯಾನೊಮೊಲಾರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಅಂಗೀಕೃತ ಮತ್ತು ಅಂಗೀಕೃತವಲ್ಲದ NLRP3 ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.MCC950 NLRP3 ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಆದರೆ AIM2, NLRC4, ಮತ್ತು NLRP1 ಉರಿಯೂತದ ಮಾರ್ಗಗಳು ಅಥವಾ TLR ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳ [27] ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ.MCC950 NLRP3 ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಆದರೆ NLRP3 ಪ್ರಾರಂಭ, K+ ಹರಿವು, Ca2+ ಒಳಹರಿವು, ಅಥವಾ NLRP3 ಮತ್ತು ASC ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವುದಿಲ್ಲ;ಬದಲಿಗೆ, ಇದು ASC ಆಲಿಗೋಮೆರೈಸೇಶನ್ [27] ಅನ್ನು ತಡೆಯುವ ಮೂಲಕ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ನಂತರ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಪಾತ್ರವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ನಾವು ಇನ್ ವಿವೋ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ MCC950 ಅನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ.ಸಕ್ರಿಯವಾದ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 p10 ಪ್ರೊ-ಇನ್‌ಫ್ಲಮೇಟರಿ ಸೈಟೊಕಿನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರೊ-IL-1β ಮತ್ತು ಪ್ರೊ-IL-18 ಅನ್ನು ಪ್ರಬುದ್ಧ IL-1β ಮತ್ತು IL-18 [50] ಆಗಿ ವಿಭಜಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, MCC950 ಜೊತೆಗೆ ಅಥವಾ ಇಲ್ಲದೆಯೇ ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಮಾಡಿದ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ ಸೀರಮ್ IL-1β ಮಟ್ಟವನ್ನು NLRP3 ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆಯೇ ಎಂಬುದರ ಸೂಚಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ.ನಿರೀಕ್ಷೆಯಂತೆ, MCC950 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಸೀರಮ್ IL-1β ಮಟ್ಟವನ್ನು ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು.ಈ ಡೇಟಾವು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಗಿಯಾರ್ಡಿನ್ ಆಲ್ಫಾ-7.3 NLRP3 ಮೌಸ್ ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು ಸಮರ್ಥವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಕಳೆದ ದಶಕದಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹವಾದ ಗಮನಾರ್ಹ ಮಾಹಿತಿಯು IL-17A G. ಮುರಿಸ್ ವಿರುದ್ಧ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣೆಯ ಮಾಸ್ಟರ್ ರೆಗ್ಯುಲೇಟರ್ ಆಗಿದೆ, IL-17RA ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ, ಆಂಟಿಮೈಕ್ರೊಬಿಯಲ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ [51].ಆದಾಗ್ಯೂ, ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಸೋಂಕು ಯುವ ವಯಸ್ಕರಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಯುವ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾ ಸೋಂಕು ಅದರ ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರಲು IL-17A ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ [52], ಇತರ ಇಮ್ಯುನೊಮಾಡ್ಯುಲೇಟರಿ ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾವನ್ನು ಹುಡುಕಲು ಸಂಶೋಧಕರನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ.ಹೆಲ್ಮಿನ್ತ್ ಸೋಂಕಿನ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು.ಇತ್ತೀಚಿನ ಅಧ್ಯಯನದ ಲೇಖಕರು ಜಿ.ಮುರಿಸ್ ಇ.ಕೋಲಿ ಇಪಿಇಸಿಯಿಂದ ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ3 ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದಾರೆ, ಇದು ಆಂಟಿಮೈಕ್ರೊಬಿಯಲ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಲಗತ್ತಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಮತ್ತು ಕರುಳಿನಲ್ಲಿನ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಕೊಲೊನ್ನ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಬ್ಯಾಸಿಲ್ಲಿ [49] ನಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ರೋಗಗಳು.NLRP3 ಉರಿಯೂತವು ವಿವಿಧ ರೋಗಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿದೆ.ಸ್ಯೂಡೋಮೊನಾಸ್ ಎರುಗಿನೋಸಾ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಆಟೋಫೇಜಿಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಮತ್ತು ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು NLRP3 ಉರಿಯೂತದ [53] ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ.N. ಕ್ಯಾನಿನಮ್‌ಗೆ, NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಆಮ್ಲಜನಕ ಜಾತಿಯ-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಹೋಸ್ಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಅದರ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಂಭಾವ್ಯ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಗುರಿಯಾಗಿದೆ [9].ಪ್ಯಾರಾಕೊಕ್ಸಿಡಿಯೋಯ್ಡ್ಸ್ ಬ್ರೆಸಿಲಿಯೆನ್ಸಿಸ್ ಇಲಿಯ ಮೂಳೆ ಮಜ್ಜೆಯಿಂದ ಪಡೆದ ಡೆಂಡ್ರಿಟಿಕ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಉರಿಯೂತದ ಸೈಟೊಕಿನ್ IL-1β ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಅತಿಥೇಯ ರಕ್ಷಣೆಯಲ್ಲಿ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ [10].L. ಅಮೆಜೋನೆನ್ಸಿಸ್, L. ಮೇಜರ್, L. ಬ್ರೆಜಿಲಿಯೆನ್ಸಿಸ್ ಮತ್ತು L. ಇನ್ಫಾಂಟಮ್ ಚಾಗಸಿ ಸೇರಿದಂತೆ ಹಲವಾರು ಲೀಶ್ಮೇನಿಯಾ ಜಾತಿಗಳು ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ NLRP3 ಮತ್ತು ASC- ಅವಲಂಬಿತ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ, ಜೊತೆಗೆ ಲೀಶ್ಮೇನಿಯಾ ಸೋಂಕು.NLRP3/ASC/caspase-1 ವಂಶವಾಹಿಯಲ್ಲಿ [11] ಕೊರತೆಯಿರುವ ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಪರಾವಲಂಬಿ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯು ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ.ಜಾಂಬೋನಿ ಮತ್ತು ಇತರರು.ಲೀಶ್ಮೇನಿಯಾ ಸೋಂಕು ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ, ಇದು ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ ಪರಾವಲಂಬಿ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ಹೀಗಾಗಿ, ಲೀಶ್ಮೇನಿಯಾವು ತಪ್ಪಿಸುವ ತಂತ್ರವಾಗಿ NLRP3 ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು.ವಿವೋ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ, ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ 3 ಉರಿಯೂತವು ಲೀಶ್ಮೇನಿಯಾದ ನಿರ್ಮೂಲನೆಗೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡಿತು, ಆದರೆ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಲಿಲ್ಲ [54].ಇದಕ್ಕೆ ವಿರುದ್ಧವಾಗಿ, ಹೆಲ್ಮಿಂಥಿಯಾಸಿಸ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ, NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು ಜಠರಗರುಳಿನ ಹೆಲ್ಮಿಂಥಿಯಾಸಿಸ್ ವಿರುದ್ಧ ಹೋಸ್ಟ್‌ನ ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಪ್ರತಿರಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುತ್ತದೆ [12].ಪ್ರಪಂಚದಾದ್ಯಂತ ಅತಿಸಾರವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವ ಪ್ರಮುಖ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳಲ್ಲಿ ಶಿಗೆಲ್ಲವೂ ಒಂದಾಗಿದೆ.ಈ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳು P2X7 ರಿಸೆಪ್ಟರ್-ಮಧ್ಯವರ್ತಿ K+ ಎಫ್‌ಫ್ಲಕ್ಸ್, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಆಮ್ಲಜನಕ ಪ್ರಭೇದಗಳು, ಲೈಸೋಸೋಮಲ್ ಆಮ್ಲೀಕರಣ ಮತ್ತು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯದ ಹಾನಿಯ ಮೂಲಕ IL-1β ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸಬಹುದು.NLRP3 ಉರಿಯೂತವು ಶಿಗೆಲ್ಲ [55] ವಿರುದ್ಧ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳ ಫಾಗೊಸೈಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾನಾಶಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ.ಪ್ಲಾಸ್ಮೋಡಿಯಂ ಅಧ್ಯಯನಗಳು AIM2, NLRP3 ಅಥವಾ ಕ್ಯಾಸ್ಪೇಸ್-1 ಕೊರತೆಯಿರುವ ಇಲಿಗಳು ಪ್ಲಾಸ್ಮೋಡಿಯಂ ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ ಟೈಪ್ 1 ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ಲಾಸ್ಮೋಡಿಯಂ ಸೋಂಕಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ನಿರೋಧಕವಾಗಿರುತ್ತವೆ [56].ಆದಾಗ್ಯೂ, ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ರೋಗಕಾರಕ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುವಲ್ಲಿ ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಪಾತ್ರವು ಅಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿದೆ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, MCC950 ನಿಂದ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರತಿಬಂಧವು BW ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿನ ಕರುಳಿನ ಲ್ಯಾವೆಜ್ ದ್ರವದಲ್ಲಿ ಟ್ರೋಫೋಜೋಯಿಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು, ಇದು ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ತೀವ್ರವಾದ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಬದಲಾವಣೆಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಆತಿಥೇಯ ಮೌಸ್ ಎನ್‌ಎಲ್‌ಆರ್‌ಪಿ 3 ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಇಲಿಯ ದೇಹದ ತೂಕವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ, ಕರುಳಿನ ಲ್ಯಾವೆಜ್ ದ್ರವದಲ್ಲಿ ಟ್ರೋಫೋಜೊಯಿಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಡ್ಯುವೋಡೆನಲ್ ಗಾಯಗಳನ್ನು ನಿವಾರಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್ NLRP3 ಹೋಸ್ಟ್ ಉರಿಯೂತವನ್ನು ಆಲ್ಫಾ-2 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7,3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್ ಮೂಲಕ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು, ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್‌ನ ರೋಗಕಾರಕತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ, ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಆಲ್ಫಾ-2 ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ-7.3 ಗಿಯಾರ್ಡೈನ್‌ಗಳು NLRP3 ಹೋಸ್ಟ್ ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ G. ಡ್ಯುವೋಡೆನಾಲಿಸ್‌ನ ಸೋಂಕನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ಅಣುಗಳು ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್ ತಡೆಗಟ್ಟುವಿಕೆಗೆ ಭರವಸೆಯ ಗುರಿಗಳಾಗಿವೆ.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
ಲಿಯಾಂಗ್ AKS, ಲಿಯಾಂಗ್ AAM, ಹುವಾಂಗ್ AHC, ಸೆರ್ಗಿ KM, ಕಾಮ್ JKM.ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್: ಒಂದು ಅವಲೋಕನ.ಪ್ಯಾಟ್ ಇನ್‌ಫ್ಲಾಮ್‌ಗೆ ಡ್ರಗ್ಸ್‌ಗೆ ಅಲರ್ಜಿ ಇದೆ ಎಂದು ಇತ್ತೀಚೆಗೆ ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ.2019;13:134–43.
ಎಸ್ಕೊಬೆಡೊ ಎಎ, ಸಿಮರ್ಮನ್ ಎಸ್. ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್: ಫಾರ್ಮಾಕೊಥೆರಪಿಯ ವಿಮರ್ಶೆ.ಔಷಧಿಕಾರರ ತಜ್ಞರ ಅಭಿಪ್ರಾಯ.2007;8: 1885–902.
ಟಿಯಾನ್ ಹುಫೆಂಗ್, ಚೆನ್ ಬಿನ್, ವೆನ್ ಜಿಯಾನ್ಫೆಂಗ್.ಗಿಯಾರ್ಡಿಯಾಸಿಸ್, ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧ ಮತ್ತು ಹೊಸ ಗುರಿಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರ.ಅಸ್ವಸ್ಥತೆಯ ಔಷಧ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಸೋಂಕು ಮಾಡುತ್ತದೆ.2010;10:295–302.
ವಾಂಗ್ ಝಡ್, ಜಾಂಗ್ ಎಕ್ಸ್, ಕ್ಸಿಯಾವೋ ಯಿ, ಜಾಂಗ್ ಡಬ್ಲ್ಯೂ, ವು ಎಕ್ಸ್, ಕ್ವಿನ್ ಟಿ, ಇತ್ಯಾದಿ. NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತದ ಕಾಯಿಲೆಗಳು.ಆಕ್ಸೈಡ್ ಮೆಡ್ ಸೆಲ್ ಲಾಂಗೆವ್.2020;2020:4063562.
ಚೆನ್ GY, Núñez G. ಕರುಳಿನ ಉರಿಯೂತ ಮತ್ತು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ನಲ್ಲಿ ಉರಿಯೂತದ ಪಾತ್ರ.ಗ್ಯಾಸ್ಟ್ರೋಎಂಟರಾಲಜಿ.2011;141:1986–99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಸಹಿಷ್ಣುತೆ ಮತ್ತು ಕರುಳಿನ ಉರಿಯೂತದ ಕ್ರಾಸ್ರೋಡ್ಸ್ನಲ್ಲಿ ಅಂಗೀಕೃತ ಮತ್ತು ವಿಲಕ್ಷಣವಾದ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ.ಪೂರ್ವ ರೋಗನಿರೋಧಕ.2017;8:36.
ಲಿ ಎಲ್, ವಾಂಗ್ ಎಕ್ಸ್‌ಸಿ, ಗಾಂಗ್ ಪಿಟಿ, ಜಾಂಗ್ ಎನ್, ಜಾಂಗ್ ಎಕ್ಸ್, ಲಿ ಎಸ್, ಮತ್ತು ಇತರರು.ROS-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ NLRP3 ಉರಿಯೂತದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು N. ಕ್ಯಾನಿನಮ್ ಸೋಂಕಿನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ.ಪರಾವಲಂಬಿ ವೆಕ್ಟರ್.2020;13:449.